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链霉亲和素(SA)的荧光标记(FITC/TRITC/CY3/CY5/thiol)简述和应用
发布时间:2020-11-19     作者:zhn   分享到:


链霉亲和素(SA)简述:

链霉亲和素(SA)Streptomyces avidinii菌的分泌物,其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似,等电点6.0,非特异性结合远比亲和素低。


链霉亲和素(SA)的来源:

SA Streptomyces avicllrdi菌培养过程中的分泌产物,主要通过2一亚氨基生物索亲和层析法提纯,1L培养液中含蛋白10~60mg。链霉亲和素是四聚体蛋白,大小为66KDa。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合。

 QQ截图20201119171207.png

链霉亲和素(SA)的应用:

enzyme immunoassays, 酶免疫测定

immunohistochemistry, 免疫组织化学

flow cytometry, 流式细胞仪

Western blot, 原位杂交

immunoblotting procedures免疫印迹程序

Western blot免疫印迹

 

链霉亲和素(SA)的荧光标记物及激发波长:

荧光染料

颜色

Exnm

Emnm

FITC

绿色

490

525

TRITC

黄色

547

572

Cy3

黄色

555

570

Cy5

红色

646

620

Cy7

深红色

750

773

 

Streptavidin-FITC

Streptavidin-TRITC

Streptavidin-CY5

Streptavidin-CY3

Streptavidin-thiol

FITC-BSA

TRITC-BSA

BAS-CY5

BAS-CY3

BAS-Biotin

Concanavalin A-CY5

Concanavalin A-CY3

Concanavalin A-CY5.5

Concanavalin A-FITC

Concanavalin A-Biotin

Concanavalin A-SH

Concanavalin A-TRITC


荧光标记的链霉亲和素(SA)的介绍:

FITC-Streptavidin

FITC是使用的荧光基团,但其缺点是淬灭快,使用抗淬灭剂可以减轻。

花青染料(Cy2,Cy3,Cy5,Cy7-Streptavidin):

Cy2FITC更稳定,且在表面荧光显微镜下,Cy2的荧光FITC更强。Cy3Cy5比大多数荧光基团更亮,更稳定。二者常在共聚焦显微实验中作多标记。但Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察,因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。

TRITC-Streptavidin:

TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标记实验中,也可以使用RRXTR在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时,RRX尤其有用,可以和Cy2(或FITC)及Cy5一起使用,因为RRX的发射波长在Cy2Cy5中间,且和这两者的重叠很少。

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以上资料来自小编zhn2020.11.19

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