提供一种小鼠活体成像的实验流程和实验步骤-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安齐岳生物

小鼠经过常规（气麻、针麻皆可）后放入成像暗箱平台，软件控制平台的升降到一个合适的视野，自动开启照明灯（明场）拍摄一次背景图。下一步，自动关闭照明灯，在没有外界光源的条件下（暗场）拍摄由小鼠体内发出的特异光子。明场与暗场的背景图叠加后可以直观的显示动物体内特异光子的部位和强度，完成成像操作。值得注意的是荧光成像应选择合适的激发和发射滤片，生物发光则需要成像前体内注射底物激发发光。

3. 数据处理：

小动物活体成像图像处理软件除了提供含有光子强度标尺的成像图片外，还能计算分析发光面积、总光子数、光子强度的相关参数供实验者参考。

下面提供一种小鼠活体成像的实验步骤：
1).SPF级 BALB/C裸鼠，6～8 周龄，18～20克，实验前24 h 自由进食、饮水。
2).于实验裸鼠腹腔内注射2%戊巴比妥钠300μL(215 mg/ kg)动物。将裸鼠俯卧位平放于小动物多光谱活体成像系统的记录暗箱中。实验时将Cy7或Cy7标记的生物分子或**溶于水(或甲醇/乙醇/乙二醇，有时DMSO 200uL能把小鼠杀死)稀释后，于裸鼠尾静脉注射200μL(浓度0.5 mg/mL)[用量和时间需要客户根据自己的仪器和**试剂等条件优化]。每5min 记录1 张动物在体内发射荧光的成像图片，分析荧光**的分布情况。对照鼠不注射**，进行同时记录。记录结束后迅速解剖裸鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器，进行成像。
3).Cy7 检测时激发波长700～770 nm带通，发射波长790 nm长通。液晶可调谐滤光片扫描范围 780～950 nm，扫描步进10 nm。曝光时间为500 ms。

结果说明：

不同的**代谢时间不一样，注射入裸鼠体内，荧光立即分布全身，然后逐步向膀胱聚集，呈现**的肾排泄的特点一般4～6小时，快的只有30分钟;如果是骨骼和鼻腔等部位靶点的Cy7标记**，有客户反映一周后活体成像系统仍能检测到荧光成像。器官切片观察：将解剖的器官迅速放置于4%多聚甲醛固定4小时以上，0%，20%，30%PBS蔗糖依次沉底，20μm切片，多聚赖氨酸洗过的载玻片贴片，晾干，DAPI染色。共聚焦显微镜观察，激光器为氦氖 633 nm。