靶向LC-MS/MS数据中未标记(12C)代谢物和标记(13C)同位素的聚类
发布时间:2020-12-21     作者:wyf   分享到:
除了细胞的体外代谢流分析外,还通过静脉注射10%(wt/vol)U-13C6-葡萄糖溶液标记小鼠来追踪体内代谢,进行组织和的体内同位素标记研究。此策略可用于确定对特定代谢途径有贡献的营养物质的分布,但它不能用于比较组织或动物之间的标记程度。
动物间标记程度和变异性的代表性数据如图5所示。此外,为了增加葡萄糖标记量,在监测血糖水平的同时,特别是在等待血糖水平下降的时候,使用手持式测量仪可以增强组织/的富集。数据显示肝脏和血清中13C标记浓度先高(图5)。还探索了其他小鼠模型,包括三阴性****,分析了中心碳代谢物途径,包括糖酵解、TCA循环和不同激酶处理后的PPP。
在Excel中利用Omix Visualization等软件进行数据处理后,可将13C / 12C通量比数据映射到已知的代谢途径上。图6是Brca1-/-和P53-/-突变的K14三阴性****细胞。数据表明,2-DG**降低了通过糖酵解和PPP产生的13C葡萄糖的流量(图6a),化合物968不是通过糖酵解13C葡萄糖通量,而是通过增加K14细胞糖酵解和PPP的通量来补偿TCA循环(图6b)。
图6 使用OMix Visualization实现代谢流分析的可视化
以上数据表明,多种13C /15N同位素标记试剂(例如13C-葡萄糖,13C-谷氨酰胺,15N-谷氨酰胺)可用于从体外细胞系到体内的多种样品来源,而且不限于葡萄糖和谷氨酰胺,还包括许多其他代谢营养物质。本文介绍的靶向同位素代谢流平台可以追踪生物系统中中心碳代谢产物的命运及其动态代谢通量模式。该平台还可应用于体外细胞/组织/生物流体实验和体内生物系统研究。
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