脂肪组织巨噬细胞来源的外泌体miRNA可在体内和体外调节胰岛素敏感性

鉴定巨噬细胞能否分泌miRNA：

（1）小室实验

用于证明外泌体从供体细胞释放后，能到达受体细胞，且外泌体以及它体内的货物均能被受体细胞吸收。将Cy3标记miR-233 mimic的转染进骨髓源性巨噬细胞（BMDMS），然后培养于Transwell的上室，下室是不表达Cy3标签的3T3-L1脂肪细胞。共培养12h后，在下室中观察得红色荧光的Cy3-miR-233，是共培养前的6倍，表明这两种细胞间存在一种介质起了运输miRNA的作用（图1）。在对照实验中，我们用Cy3单独(不与miR-223结合)处理BMDMs，在与这些BMDM共培养12小时后，发现这种荧光染料在BMDMs中的出现可忽略不计，在3T3-L1脂肪细胞中没有染料出现（图2）。因此，认为巨噬细胞可以分泌细胞外miRNA，它们被摄取到脂肪细胞中。

鉴定ATM能否分泌外泌体:

为了确认脂肪组织巨噬细胞（ATM）是否可以外泌体，从肥胖野生型小鼠的内脏脂肪组织（VAT）中分离出脂肪组织巨噬细胞(ATM)（CD11b+F4/80+），并培养72小时，电子显微镜（图4）和纳米观察分析（图5）显示，通过超速离心分离的颗粒含有丰富的ATM分泌的胞外小泡，其直径为30-100 nm。这些EV的密度梯度超速离心分析证实，它们主要由Exos组成，通过外体特异性蛋白标记物TSG101、syntenin1、CD63等的表达得到证明，主要以图6表示。

图3. 超速离心分离外泌体

图4.电镜观察外泌体**杯状囊膜结构

图5.NTA分析外泌体的粒径和浓度表征

图6.Westernblot鉴定TSG101等外泌体蛋白标志物

产品供应：

胞外囊泡/细胞微粒/微囊泡/外泌体/EVs/exosomes    

含RNA和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)    

绵羊网织红细胞-外泌体    

直径40-100nm的盘状囊泡    

exosome/外泌体    

细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体    

多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中    

细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体    

细胞类型均可分泌外泌体    

特异性分泌的膜泡    

外泌体含胆固醇和鞘磷脂    

肥大细胞分泌外泌体    

mRNA，exosomes具有生物活性    

41860种蛋白质、2838种microRNA、3408种mRNA    

Rabs蛋白/鸟苷酸三磷酸酶(GTPases）    

调节外泌体膜与受体细胞的融合    

外泌体中含RAB4, RAB5和 RAB11，RAB7 和 RAB9    

膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11    

四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9)    

热休克蛋白家族（(HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90    

细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）    

MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)    

CD86(抗原提呈细胞来源)    

乳凝集素（不成熟的树突状细胞）    

外泌体中的蛋白含代谢类的酶    

GAPDH    

烯醇化酶 1    

醛缩酶 1    

PKM2    

PGK1    

PDIA3    

GSTP1    

DPP4    

AHCY    

TPL1    

抗氧化蛋白    

P4HB    

LDH    

亲环素 A    

FASN,    

MDH1    

CNP    

核糖体蛋白（RPS3）    

信号转导因子    

黑色素瘤分化相关因子    

ARF1    

CDC42    

人类红细胞膜整合蛋白    

SLC9A3R1    

粘附因子    

MFGE8    

整合素    

细胞骨架蛋白    

泛素    

人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体    

应用：机体免疫应答    

抗原提呈    

细胞迁移    

细胞分化    

**侵袭    

细胞膜外泌体    

外泌体产生于细胞中的多泡体    

外泌体研究整体方案设计；    

外泌体提取/粒径测量/电镜检测；    

外泌体蛋白组/转录组    

客户提供样本提取外泌体    

外泌体抽离/抽提    

全自动外泌体荧光检测分析系统    

外泌体分离产品和工具    

外泌体分离/提取    

外泌体整体技术服务    

外泌体lncRNA芯片    

外泌体small RNA    

外泌体提取    

外泌体染色：PKH67/PKH26    

外泌体WB鉴定    

CD81外泌体慢病毒包装    

CD63外泌体慢病毒包装    

CD9外泌体慢病毒包装    

外泌体粒径检测    

外泌体电镜检测/透射电镜    

外泌体蛋白组分析    

外泌体标记/鉴定/分离/提取/    

外泌体(Exosomes)鉴定    

外泌体marker抗体    

外泌体CD9抗体    

外泌体CD81抗体    

外泌体CD63抗体    

外泌体分离单克隆抗体    

Anti CD9,CD63,CD81    

细胞外囊泡标记外泌体单克隆抗体    

细胞外囊泡(外泌体和微囊泡)    

标记外泌体试剂    

外泌体流式细胞分子    

外泌体细胞成像    

外泌体细胞结构成像    

外泌体标记化学    

外泌体荧光选择标记    

外泌体免疫分析    

外泌体神经科学    

外泌体细胞示踪    

外泌体细胞追踪    

外泌体细胞形态学    

外泌体单细胞分析    

外泌体微生物分析    

外泌体荧光微孔技术    

外泌体RNA-微生物    

FITC外泌体捕获亲和磁珠    

CD63抗体免疫捕获外泌体    

**靶向外泌体    

靶向**衍生外泌体    

外泌体仿生靶向**    

外泌体仿生纳米**/颗粒    

外泌体可诱导 T 细胞的凋亡    

调控功能性 T 细胞 (Treg)     

诱导 M2 巨噬细胞的极化    

**自然杀伤细胞 (NK) 的抗**毒性    

**树突状细胞的 (DC) 分化为成熟 DC    

外泌体基因改造    

上述产品仅用于科研，不可用于人体试验！

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