一、概述
CY3-NHS,即Cyanine 3 N-Hydroxysuccinimide ester,是一种常用的红色荧光标记试剂。它结合了Cyanine 3(CY3)荧光团和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯,使得该试剂能够与含有氨基的生物分子(如抗体、蛋白质等)进行反应,形成稳定的酰胺键,从而实现荧光标记。
二、结构特性
分子结构:CY3-NHS包含一个三环的荧光骨架,其活性部分是一个NHS酯的功能团。
化学式:通常包含Cyanine 3荧光团与NHS酯的结合体。
外观:呈现为红色粉末或固体。
分子量:根据不同的生产商和具体产品,分子量可能有所不同,但通常在590.15至765.93之间。
三、物理性质
溶解性:不溶于水,但溶于有机溶剂如二氯甲烷、DMF(二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲基亚砜)等。
四、应用领域
免疫荧光技术:
标记抗体:CY3-NHS常用于标记抗体,用于检测和定位特定的抗原或细胞表面分子。
免疫组化染色:在免疫组化染色中,将CY3-NHS与特定的一抗结合,然后将该标记的一抗与待测组织切片中的相应抗原结合。通过检测CY3-NHS的荧光信号,可以可视化和定量分析抗原在组织切片中的分布和定位。
免疫细胞染色:在免疫细胞染色中,CY3-NHS与特定的一抗结合,用于标记细胞表面的抗原或标志物,从而实现对这些分子的可视化和定量分析。
FRET(荧光共振能量转移)技术:
CY3-NHS在FRET技术中常用作给体或受体染料,用于研究分子间的相互作用和距离变化。例如,在蛋白质相互作用研究中,可以将CY3-NHS与给体染料标记在一种蛋白质上,将受体染料标记在另一种蛋白质上。当这两种蛋白质发生相互作用时,FRET信号的强度和效率会发生变化,从而可以推断出它们的相互作用程度和动力学参数。
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