名称:荧光素标记转铁蛋白 ,FITC-transferrin
纯度:98%
包装:mg级和g级
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
储存时间:1年
保存:冷藏
温馨提醒:仅供科研,不能用于人体实验
将荧光素异硫氰酸酯(FITC, Fluorescein Isothiocyanate)标记到转铁蛋白(Transferrin, Tf)上是一种常用的技术,用于生物标记和成像。FITC 是一种常用的绿色荧光染料,能够与氨基(-NH₂)反应形成共价键。转铁蛋白是一种重要的铁转运蛋白,常用于细胞内铁的跟踪和定量研究。
标记步骤
1. 准备 FITC 和转铁蛋白
FITC:使用 FITC-异硫氰酸酯,它是 FITC 的活性形式,适用于与氨基发生反应。
转铁蛋白:使用纯化的转铁蛋白溶液,通常在适当的缓冲液中,如 PBS(磷酸盐缓冲液)或 HEPES。
2. 反应条件
pH: FITC-异硫氰酸酯 在略碱性的条件下反应**有效,一般 pH 7.0-9.0 的缓冲液适合。
温度: 反应通常在室温下进行,避免高温以防止FITC荧光强度的下降。
3. 标记反应
溶解 FITC: 将 FITC-异硫氰酸酯溶解在适当的有机溶剂中,如 DMSO 或 DMF(N,N-二甲基甲酰胺),以获得所需的浓度。
混合: 将 FITC 溶液缓慢加入到转铁蛋白溶液中。通常 FITC 的用量应为转铁蛋白浓度的 10-20 倍,以确保充分标记。
反应: 轻轻混合并在室温下反应 1-2 小时。反应过程中的 pH 值和温度需要保持稳定。
4. 终止反应
终止反应: 通过加入适量的还原剂(如 2-巯基乙醇)或通过调整 pH 值来终止反应。
清洗: 通过透析、凝胶过滤或离心等方法去除未反应的 FITC 和其他副产物,获得纯化的 FITC-标记转铁蛋白。
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