一、磁珠分选原理
磁珠分选是基于细胞表面抗原能与偶联抗体的磁珠特异性结合,从而使细胞被标记。标记好的细胞过柱子(柱子周围连磁铁)时,带磁珠的细胞就留在柱子上,不带磁珠的细胞就流走了,从而实现目的细胞的分选。
二、细胞标记方式
利用磁珠分选细胞的关键点就是细胞标记。标记方式有两种,包括直接标记和间接标记。
1、 直接标记
直接标记就是标记目的细胞,是较快速、较特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。
2、 间接标记
间接标记就是标记非目的细胞,需要联合使用单克隆或多克隆抗体和微珠。未结合抗体、生物、生物素化抗体或荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞,再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠等作为二抗磁性标记细胞。
三、磁珠分选策略
根据细胞标记方式可以选择不同的磁珠分选策略。
1阳性分选
阳性分选是目的细胞被磁性标记,并直接分选出来,标记的细胞可富集10000倍。分选后的细胞不必去除微珠,可立即培养或后续操作,其优势是纯度高,回收率高,操作迅速,操作简便。
2阴性分选
阴性分选又叫去除分选,磁性标记非目的细胞,从而将非目的细胞从细胞混合物中去除。其适用范围包括以下几个方面:
① 去除不需要细胞;
② 缺乏针对目的细胞的特异性抗体;
③ 不需要抗体和目的细胞结合,如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析;
④ 需要进一步通过阳性选择分选细胞亚群。
3复合分选
复合分选其实就是阴性分选和阳性分选的结合。如先阴性分选,去除非目的细胞,然后再阳性分选,获取目的细胞。这种分选策略的适用范围包括:
①非目的细胞也表达用来阳性分选目的细胞的抗原;
② 要分选稀有、珍贵细胞,先去除非目的细胞再阳性分选,可获得高纯度目的细胞。