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叶酸靶向修饰纳米红细胞膜包裹阿霉素FA/PEG-DOX-Nano-RBCs(纳米药物递释系统)

发布时间：2021-01-29 作者：axc 分享到：

西安齐岳生物科技有限公司是一家集工业生产，分子生物、生化试剂、常规试剂、常用耗材与进口试剂代理生物科研公司，齐岳生物拥有一站式实验室采购服务能力，产品链供应完备，涉及有机金属试剂、常用生化试剂、分子生物学试剂、分子生物学领域等相关产品、现我们提供定制产品叶酸靶向修饰纳米红细胞膜包裹阿霉素FA/PEG-DOX-Nano-RBCs产品，将制备方法总结如下：

本研究采用低渗裂解法及纳米挤出工艺，制备了叶酸和聚乙二醇共同修饰的纳米红细胞膜药物载体，并以此负载盐酸阿霉素构建了一种具有长循环和药物靶向双重作用的新型纳米**递释系统（FA/PEG-DOX-Nano-RBCs）。该载药系统利用了红细胞膜的生物相容性， PEG 长循环作用及叶酸配体的**识别靶向特性，有望提高阿霉素的抗**药效，降低其毒副作用，

FA/PEG-DOX-Nano-RBCs的制备流程图如图1所示,其具体操作过程如下:

（1）压积红细胞的提取

大鼠眼眶静脉丛取全血,4000 rpm离心10min弃去血浆和白细胞层，加入4倍体积预冷的 PBS溶液充分吹打，4000rpm离心10min弃上清，并重复上述操作3次，得到压积红细胞。

（2）血影红细胞（ghost）的制备

取1mL 压积红细胞，加入4倍体积低渗0.25×PBS 溶液4 ℃孵育20 min （5 min 上下颠倒一次），6000rpm 离心10min，弃上清，再加入4倍体积低渗PBS溶液反复清洗直到上清无色，制得血影红细胞。

叶酸配体修饰过程制备

取相同体积PBS配制的FA-PEG-DSPE 以 mPEG-DSPE溶液加入上述制备的血影细胞中，于37℃摇床上孵育1h，4000rpm离心5min去除游离FA-PEG-DSPE及mPEG-DSPE，制得叶酸及PEG修饰后的血影红细胞。

（4）FA/PEG-DOX-RBCs的制备

取1mL经叶酸修饰的血影红细胞，加入4倍体积一定浓度的DOX（溶于0.25×PBS）溶液， 4℃条件下振摇孵育30min，加入计算体积的10×PBS浓缩液，室温振摇孵育90min。 6000rpm 离心10 min，弃上清，用 PBS 溶液洗涤三次，充分弃去游离 DOX，加入 4 倍体积PBS溶液，混匀，得到 FA/PEG-DOX-RBCs混悬液。

(5)FA/PEG-DOX-Nano-RBC的制备

取上述制备的 FA/PEG-DOX-RBCs 混悬液 5 mL，药物用 20%功率探头超声5min，其次采用脂质挤出法使其依次通过 800 nm、 400 nm、 200 nm、 100 nm 孔径的聚碳酸酯膜 21 次，得到 FA/PEG-DOX-Nano-RBC 混悬液。将FA/PEG-DOX-Nano-RBC 混悬液置于 5 mL 超滤离心管内， 6000 rpm离心 10 min，甩去游离 DOX，将超滤离心后得到的 FA/PEG-DOX-Nano-RBC 重新悬浮于 PBS溶液中， 4 ℃避光储存于冰箱中备用。