免疫沉淀、ChIP、蛋白互作、亲和纯化等实验里,核心的环节就是用微球进行目标蛋白的钓取纯化 ,而较常用的就是各种包被的琼脂糖微球,而随着大家对回收率、纯度以及实验便捷性的要求提升,越来越多的人开始选用磁性微球。
磁性微球相比琼脂糖微球的优势:
回收率高
琼脂糖纯化中,琼脂糖珠在离心之后,弃去上清。在吸液过程中,为了尽可能移去上清,往往会吸走一部分琼脂糖,这样就可能损失一部分目的蛋白。同时,琼脂糖珠在离心过程中也可能破裂,这样就又损失了一部分目的蛋白。
磁珠纯化中,携带目的蛋白的磁珠通过磁性吸附在管壁上,此时吸取上清不会“捎带”走带有目的蛋白的磁珠,而磁珠也不需要应付颇具考验的离心步骤,这样双管齐下就保证了磁珠比琼脂糖珠有更高的回收率,对于蛋白互作、ChIP实验来说,更容易获得可靠的检出结果。而对于RIP这样对于检测灵敏度要求更高的实验来说,基于磁珠的纯化是**推荐的途径。
特异性好
琼脂糖纯化中,琼脂糖珠本身结构比较复杂,容易非特异性结合蛋白和DNA,对于蛋白互作研究或者ChIP实验产生非特异性的干扰。此外,在离心去除上清的过程中,也可能由于吸取上清不彻底,从而残留一些实际未与微球结合的蛋白/DNA,从而产生非特异性结果。
磁珠纯化中,由于磁珠表面光滑,非特异性结合率**,因此背景比琼脂糖低的多。另外由于磁珠纯化时,去除上清更加彻底,残留的未结合蛋白/DNA对结果的干扰也能被去除。
琼脂糖微球的非特异性结合
琼脂糖天然的非特异性结合属性往往会给实验带来意想不到的背景,需要**设置多个对照和反复实验来进行核实与验证。而对于ChlP实验来说,也不能直接使用普通琼脂糖珠,而是需要先用鲑鱼精DNA等试剂进行封闭
操作简便速度快
在IP实验中,琼脂糖珠、抗体、目标蛋白往往需要很长时间的孵育才能充分进行结合。而使用磁珠后,往往只需要更短的时间就可以完成充分的结合,这**的提升了实验速度。
同时,磁珠无需进行离心,可以使用磁力架进行“秒速”分离,可以迅速进行后续的去上清、清洗步骤。再也不用盯着琼脂糖珠的固液界面小心翼翼的进行上清分离了。
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Strep-tag II蛋白纯化磁珠 | |
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核酸提取磁珠 | 游离DNA提取试剂盒 |
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病毒DNA/RNA提取试剂盒 | |
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Oligo dT磁珠 |
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wyf 02.01