白介素10（IL-10）是一种功能强大的免疫调节剂，具有强大的和组织再生能力。在AKI中，研究表明IL-10可以通过限制炎症细胞因子的产生和免疫细胞浸润来预防缺血，顺铂或输尿管梗阻引起的肾损伤，这表明IL-10可能成为AKI的新型疗法。

我们发现胞外囊泡作为强大的纳米载体进行**输送在化学、基因等领域展现出巨大的应用前景。与现有的递送系统相比，细胞外囊泡的独特优势是其来源，这使其能够逃避吞噬作用，延长**循环半衰期并降低免疫原性。因此，基于EV的**递送系统可能是推动IL-10用于AKI的新型给药策略。

因此，我们研究了一种从巨噬细胞衍生的负载IL-10的细胞外囊泡（IL-10+EV）的制备方法，并研究了IL-10+细胞外囊泡在缺血性AKI鼠模型中的效果。IL-10+EV能够增强IL-10的稳定性，并地靶向损伤的肾脏，这是由于其表面富含粘附成分包括整联蛋白α₄β₁，α₅β₁，α_Lβ₂和α_Mβ₂。IL-10+EV的不仅可靶向肾小管间质中的巨噬细胞，而且可靶向肾中的肾小管上皮细胞（TECs），可****肾脏缺血/再灌注（I/R）损伤，并防止AKI向CKD的转变。具体而言，文章显示IL-10 + EV了哺乳动物雷帕霉素（mTOR）的靶标，因此促进了线粒体代谢以维持TEC中的线粒体稳态。同时，IL-10 + EV还可诱导巨噬细胞向M2型转化，促进肾脏。这个发现强烈支持将细胞外囊泡用作IL-10的多功能递送系统，将其作为缺血性AKI的策略。

【图文导读】

图1.IL-10+细胞外囊泡的制备和表征

A）用RFP标记的IL-10转染RAW细胞，然后用地塞米松刺激

（B）在工程RAW细胞中对IL-10（绿色）和EV标记CD63（红色）进行免疫染色

（C）在IL-10+细胞外囊泡中对EV相关的（Alix，CD63和CD81）和巨噬细胞相关的标志物（CD68和CD206）进行蛋白质印迹分析

（D）IL-10+细胞外囊泡的尺寸分布和代表性TEM图像

（E）显示从抗体阵列分析获得的每种细胞因子的蛋白质水平

（F）细胞外囊泡中IL-10的ELISA分析，以及IL-10+细胞外囊泡中的IL-10和IL-10受体的蛋白质印迹分析（n = 3或6）

（G）通过实时定量PCR测量IL-10+细胞外囊泡中的IL-10 mRNA

（H-1）比较IL-10 +细胞外囊泡和游离IL-10在不同条件下的稳定性，包括在37°C或-80°C下放置一周，在pH 5.5溶液中12小时

图2.肾靶向IL-10+EV

（A）以亲代RAW细胞为对照的IL-10+EVs蛋白质组成的LC-MS/MS分析

（B）蛋白质印迹分析

（C-E）为了分析体内分布，给小鼠静脉注射DID标记的IL-10+EV（n=3）

（C）注射后6、12、24、48和96小时（缺血时间35分钟）对指定器官的荧光强度成像

（D）缺血20分钟，28分钟和35分钟的IRI肾脏在12小时时的荧光强度成像

（E）代表性共聚焦图像显示DID标记的IL-10+EV在小管（包括近端小管和远端小管），内皮细胞（CD31）和巨噬细胞（CD68）中的蓄积

（F-G）H/R诱导的TECs摄取PKH67标记的IL-10+EV（n = 3）

图3.IL-10+EV可预防小鼠的肾脏I/R损伤

（A）实验设计示意图

（B）IL-10+EV对血清肌酐的影响（n = 10）

（C）基于H＆E染色的肾小管损伤的量化（n = 10）

（D）肾皮质和髓质的H＆E染色的代表性图像

（E-G）TUNEL染色和凋亡细胞定量的代表性图像（n = 6）

（F-H）代表性共聚焦图像和KIM-1+小管的定量（n = 6）

（I）肾脏组织中caspase-3的蛋白质印迹分析（n = 3）

（J）实时定量PCR分析肾脏组织中炎性细胞因子mRNA水平（n = 6）

图4.IL-10+EVs引起肾巨噬细胞表型转变

（AB）分别用LPS，IL-4+IL-13或不同剂量的IL-10+EV刺激BMDM 48小时（ n = 3）

（C-E）IRI组与IL-10+EV组之间肾巨噬细胞表型变化的探讨

图6.IL-10+EVAKI-CKD转变

（A）PAS染色的代表性图像（n = 6）

（B）矢状面Masson三色染色的代表性图像（n = 6）

（C）肾组织中胶原蛋白I和α-平滑肌肌动蛋白（β-SMA）的蛋白质印迹分析（n = 4）

（D）肾脏切片中CD68+巨噬细胞和CD3+T细胞的代表性共聚焦图像（n = 6）

（E）用于缺血性AKI的IL-10+EV制剂的示意图