酵母单杂交及双杂交系统

酵母单杂交系统主要用来分离鉴定与特异 DNA 序列结合作用的蛋白质并同时获得其编码基 因 。酵母单、双杂交系统均利用了许多真核生物 转录激活因子 (transcription activator) ,如 GAL4 的 独特结构特点 ,即自身含有功能上必须的两个独立 结构域2DNA 结合域与转录激活域。

在酵母单杂交 系统中 ,与转录激活域融合的结合蛋白与靶 DNA 序列的相互作用可以同样激活报道基因的表达 ,而 酵母双杂交系统中则利用此特点可以构建两种杂合 蛋白 ,一种为已知蛋白 X 与 DNA 结合域融合的杂 合蛋白 ,一种为未知蛋白 Y与转录激活域间的融合 蛋白。当编码此两种相应杂合蛋白的表达质粒导入 酵母后 ,如果蛋白 X 和 Y 之间存在相互作用 ,则表 达产生的两种杂合蛋白会由于这种相互作用使其中 的转录激活域进入其正常作用的启动子 (UASG) 位 点而激活报道基因的表达(如 lacZ) 。其作用模式简 图见图 1。

酵母三杂交系统

生物学中常常利用小的有机配体来研究阐明许 多生物学过程 ,如信号传导和细胞分化调控等的发 生机制 ,配体2受体间的相互作用也是医药工业中药 物设计的基础。一旦某一受体被证明与某一疾病相 关 ,寻找能与此受体结合并调节其功能的配体小分子就显得极为重要 ,因为这些配体分子可以作为被 开发**的**目标。在酵母双杂交系统的基础 上 ,Licitra 等结合合成有机化学生产的异源杂交配 体 ,建立了一种体内分析配体受体相互作用的三杂 交系统[8 ] 。这种系统不仅可以用来迅速分离鉴定 与已知配体分子相互作用的受体编码 cDNA 基因 , 而且还能筛选已知受体的未知配体分子。其作用模 式见图 2。

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