荧光BSA,也称为BSA-FITC,是通过将异硫氰酸荧光素(FITC)与牛血清白蛋白(BSA)结合而制得的荧光标记蛋白。其合成方法一般包括以下步骤:
准备材料:确保异硫氰酸荧光素(FITC)和牛血清白蛋白(BSA)的质量和纯度符合实验要求。
配制交联反应液:通常包含碳酸氢钠、碳酸钠和氯化钠等缓冲剂,以调节溶液的pH值和离子强度。
透析处理BSA:将待交联的BSA蛋白溶液对交联反应液进行透析处理,以去除溶液中的杂质,并调整BSA的pH值和浓度。
FITC的溶解与添加:将FITC溶于二甲基亚砜(DMSO)中,配制成适当浓度的溶液。然后按照一定比例(如蛋白质:FITC=1mg:150μg)将FITC溶液缓慢加入BSA溶液中,边加边轻轻晃动,使FITC与BSA充分混合。
交联反应:在暗处、适宜的温度(如4℃)下进行交联反应,通常反应时间为数小时至过夜。反应期间需保持溶液的pH值和温度稳定。
终止反应与纯化:加入适量的氯化铵溶液以终止反应,并通过透析等方法去除未反应的FITC和其他杂质。最后对交联物进行鉴定和纯化,得到BSA-FITC荧光标记蛋白。
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