shRNA真核表达载体构建，定制服务

shRNA（小发卡 RNA）真核表达载体构建是一种用于基因沉默的重要技术手段。

shRNA 是一种短的 RNA 分子，能够通过 RNA 干扰（RNAi）机制特异性地抑制靶基因的表达。构建 shRNA 真核表达载体可以在真核细胞中稳定表达 shRNA，实现长期的基因沉默效果。

首先，设计针对目标基因的 shRNA 序列。通常选择靶基因的特定区域，设计互补的双链 RNA 序列，形成发夹结构。然后，将 shRNA 序列克隆到合适的真核表达载体中。载体通常包含启动子、多克隆位点、筛选标记等元件。

在构建过程中，需要确保 shRNA 序列的正确插入和表达。可以通过测序等方法验证载体的正确性。构建完成的 shRNA 真核表达载体可以通过转染等方法导入真核细胞中。

一旦进入细胞，shRNA 会被加工成小干扰 RNA（siRNA），与 RNA 诱导沉默复合物（RISC）结合，特异性地识别并降解靶 mRNA，从而抑制靶基因的表达。

一、基因敲减

基因敲减（knock-down，KD）通常也称基因沉默（Silence），是指通过降解具有同源序列靶基因的mRNA，达到阻止基因表达的作用，常用技术有siRNA，shRNA等。

二、shRNA基因敲减原理

       shRNA（short hairpin RNA），即短发夹RNA，包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔组成发夹结构，该元件由RNA聚合酶Ⅲ（PolⅢ）启动子控制。随后再连上5～6个“T”作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。该发夹序列在细胞内形成一个“双链RNA”（dsRNA），被胞内核酸内切酶（Dicer）识别并切割成小片段，这些片段在mRNA解旋酶的作用下解链。其中反义链与内切酶、外切酶、解旋酶等结合形成RNA诱导的沉默复合体（RNA-InducedSilencingComplex，RISC），RISC与靶基因mRNA的同源区特异性结合，对靶基因mRNA进行切割，从而阻断目的基因表达。

产品：

构建ZFD（氨基酸137-176）单结构域缺失的截短体质粒

eGFP-LIN28A敲入的小鼠胚胎干细胞E14细胞系

eGFP-LIN28A过表达小鼠胚胎干细胞E14细胞系

全长人环核苷酸磷酸二酯酶4B2截短突变体(152aa-528aa)

功能域截短体的原核表达质粒

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。