点突变细胞稳转株构建,技术服务
点突变细胞稳转株构建是一种用于在细胞中引入特定点突变并获得稳定表达的技术。
首先,确定需要引入点突变的目标基因和具体的突变位点。通过分子生物学设计,合成含有点突变的 DNA 片段或引物。
接下来,选择合适的细胞系进行实验。常用的细胞系包括哺乳动物细胞系、昆虫细胞系等,具体选择取决于研究目的和实验要求。
然后,使用基因编辑技术将点突变引入细胞中。常见的方法有 CRISPR/Cas9 系统结合同源重组修复或基于 PCR 的定点突变技术。例如,利用 CRISPR/Cas9 系统,设计针对目标基因的向导 RNA(gRNA),引导 Cas9 核酸酶在目标位置进行切割,然后提供含有点突变的 DNA 模板,通过细胞自身的修复机制将点突变引入基因组中。
在引入点突变后,进行细胞筛选和鉴定。可以使用筛选标记,如抗生素抗性基因,筛选出成功整合点突变的细胞。然后通过分子生物学方法,如 PCR、DNA 测序等,验证点突变的正确性。
齐岳生物提供专业基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求,结合靶基因的情况,设计不同的基因敲除方案。例如,移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。
产品:
基因cDNA经多次亚克隆插入到真核表达载体
shRNA质粒克隆
sgRNA质粒克隆
miRNA质粒克隆
miRNATUD质粒克隆
通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
利用shRNA慢病毒敲降小鼠基因
shRNA基因敲低解决方案
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。