shRNA基因敲低稳转株构建,定制服务
shRNA 基因敲低稳转株构建是一种利用小发卡 RNA(short hairpin RNA,shRNA)实现特定基因表达稳定降低的技术。
首先,设计针对目标基因的 shRNA 序列。shRNA 是一种能够通过 RNA 干扰(RNAi)机制特异性地降解目标 mRNA 的短 RNA 分子。设计的 shRNA 序列通常包含一段与目标基因 mRNA 互补的序列,以及形成发夹结构的茎环部分。
然后,构建含有 shRNA 序列的表达载体。这个载体通常包括一个启动子,用于驱动 shRNA 的表达;多克隆位点,方便插入 shRNA 序列;以及筛选标记,用于筛选稳定转染的细胞株。
接下来,将构建好的载体导入细胞中。可以使用脂质体转染、电穿孔等方法将载体高效地导入细胞。
经过筛选和培养,获得稳定转染的细胞株。利用筛选标记进行筛选,如抗生素抗性筛选,确保只有成功整合载体的细胞能够存活和生长。
在稳定转染的细胞中,shRNA 被细胞内的 RNA 加工机制处理成小干扰 RNA(siRNA),然后与 RNA 诱导沉默复合物(RISC)结合,特异性地识别并降解目标 mRNA,从而实现对目标基因的敲低。
齐岳生物提供多种类型的基因敲入服务,无论是荧光蛋白定点敲入、蛋白标签定点敲入、HiBiT定点敲入等等,均可构建。
产品:
慢病毒介导的shRNA靶向干扰基因表达
大鼠基因RNA干扰慢病毒载体的构建
靶向PRL-3基因的shRNA慢病毒载体的构建
构建慢病毒载体
慢病毒载体质粒
慢病毒载体的骨架质粒合成
构建表达载体(过表达,敲除或者敲低)
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。