新型氨肽酶底物的合成路线-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安齐岳生物

由于现有的荧光底物种类较少,迫切需要出现更多种类且廉价的酶底物来解决这些问题。Bissell等报道了7-氨基-4-三氟甲基香豆素的合成及其与氨基酸的酯化,指出该类化合物具有较好的应用前景。AFC[7-氨基-4-三氟甲基香豆素]是许多AFC酶底物的前体物质,同时也被用作以AFC为基础的酶底物的校准标准液。大量的研究结果表明,较之于AMC[7-氨基4-甲基香豆素]酶底物,AFC的荧光底物所产生的AFC比AMC具有更长的吸收和荧光波长。脯氨酸氨肽酶和丙氨酸氨肽酶是微生物体内常见的两种酶，但是利用这两种酶去水解AFC为基础的酶底物用于微生物检测还没有相关文献的报道。本文在合成两种新型氨肽酶底物用于微生物的检测。合成方法是以间氨基酚,三氟乙酸乙酯为原料一步反应得到7-氨基4-三氟甲基香豆素( AFC),再以AFC为原料分别与Boc-Pro-OH , Boc-Ala-OH反应,再经脱保护基得到氨肽酶底物。其合成路线如下所示。

实验步骤

步骤一：7-氨基-4-三氟甲基香豆素(AFC)的合成

步骤二：1.3 Ala-7-氨基-4-三氟甲基酶底物的合成

（1）Boc-Ala-7-氨基4-三氟甲基的合成

（2）Ala-7-氨基-4-三氟甲基酶底物的合成

步骤三：Pro-7-氨基-4-三氟甲基氨肽酶底物的合成

步骤四：Boc-Pro-7-氨基-4-三氟甲基的合成

（1）二氯三苯基膦的合成

（2）肽的合成

（3）Pro-7-氨基4-三氟甲基氨肽酶底物的合成

结果

Boc-Ala-7-氨基-4-三氟甲基选用**的Steg-lich酯化反应,反应步骤比较简单,但反应时间较长而且生成的副产物DCU较难处理干净。因此在合成Boc-Pro-7-氨基4-三氟甲基时,利用二氯三苯基膦为催化剂,但由于三苯基膦与六氯乙烷合成磷肽的反应有明显的溶剂效应,在二氯甲烷中反应很快,因此利用三苯基膦与六氯乙烷在二氯甲烷溶液中生成二氯三苯基膦,再与保护的氨基酸反应生产混酐,不但能使羧酸活化,而且有很好的区域选择性,在胺的亲核进攻下能惟一的生成酰胺,该反应的产率较高,而且大大缩短了反应时间。但由于二氯三苯基膦的活泼性高,易水解,因此只有在使用时才制备,而且反应过程中要注意密闭性。在脱Boc-保护基反应完成后,要先旋蒸除去大部分三氟乙酸,再用饱和NaHCO，来中和至中性。此反应的副产物都为气体,后处理简单。

从Ala-7-氨基-4-三氟甲基氨肽酶底物CNMR谱图上,可以看到由于三氟甲基的存在，氟对邻近的碳有影响,对相邻的碳影响大,碳峰缩小而且距离较远,在8 120.11 ~122.81(C-10)出现明显的裂分,分开为两个单峰;对C-3影响稍小,出现同高度的缩小的四重峰,在8140.97位置。从"3CNMR 、'HNMR谱图可以确认 Ala-7-氨基-4-三氟甲基氨肽酶底物的结构。