截短型重组质粒的构建,技术服务
截短型重组质粒是通过对目标基因进行特定部分的截断,并将其插入到质粒载体中而构建的。这种构建方式可以帮助研究人员聚焦于基因的特定区域,深入研究其功能和作用机制。
构建截短型重组质粒通常需要以下步骤。首先,确定目标基因的截断位置。这需要对目标基因的结构和功能有一定的了解,可以通过生物信息学分析、已有研究成果等途径来确定可能的截断点。然后,使用分子生物学技术,如 PCR 扩增、酶切连接等,将截断后的基因片段克隆到合适的质粒载体中。在克隆过程中,需要选择合适的酶切位点,确保截断后的基因片段能够正确地插入到质粒载体中。最后,对构建好的截短型重组质粒进行验证,包括测序、酶切分析、蛋白表达检测等,以确保质粒的正确性和有效性。
截短型重组质粒的应用非常广泛。在基础研究中,它可以帮助研究人员深入了解基因的特定区域的功能。例如,通过构建不同截断位置的重组质粒,可以确定基因的关键功能区域。在药物研发中,截短型重组质粒可以用于筛选药物靶点。通过研究截短后的基因所编码的蛋白与药物的相互作用,可以确定潜在的药物作用位点。此外,截短型重组质粒还可以用于构建基因工程菌株,生产具有特定功能的蛋白质或代谢产物。
齐岳生物生物自主开发的 CRISPR 细胞基因编辑系统,显著提高基因敲入细胞株构建过程中的高同源重组效率,并降低随机插入风险。
使用高活性gRNA:设计并筛选出高活性的gRNA是提高基因敲入效率的关键步骤。通过评估不同gRNA的切割活性,选择合适的gRNA进行实验。
优化同源重组条件:同源重组修复是基因敲入的关键步骤之一。通过优化同源重组条件,如细胞状态、转染条件、DNA模板等,可以提高基因敲入效率。
使用Cas9蛋白和gRNA的稳定表达细胞系:通过建立Cas9蛋白和gRNA的稳定表达细胞系,可以长期高效地进行基因敲入实验。
产品:
pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒
pcDNA3.1-cathepsin B质粒
pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒
PCR介导的定点突变
PEG10重组真核表达质粒
pGEX-4T-2-TK原核表达质粒
pGL3-Basic启动子报告载体
PiggyBac转座酶表达辅助载体
pLenti-Puro - 基因载体质粒
Probe-RNA体外转录载体
西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括:
(1)过表达质粒构建;
(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)
(3)构建基因截短体质粒;
(4)亚克隆质粒构建;
(5)通过慢病毒介导的基因过表达;
(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减
(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除
注意事项:
本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。
使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品,避免直接接触皮肤和眼睛。
请按照相关文献和相关安全规定进行操作,避免误用或滥用。