名称：Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit

描述：

Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酵母单杂培养基），培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装，每个独立包装可以配制0.5 L的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加入0.5 L的ddH2O，然后121 ℃灭菌15 min即可。无需称量和调整pH值。

实验材料：

酵母菌株：Y187（缺陷基因型his3-200、trp1-901、leu2-3）

诱饵载体：pHis2-DNA（筛选标记Trp报告基因His）

文库载体：pGADT7-cDNA（筛选标记Leu）

实验步骤：

一、转化诱饵载体

1. YPDA平板培养划线，活化Y187酵母菌种；挑酵母菌落于液体YPDA培养基摇菌培养；

2. 制备感受态并将pHis2-DNA转化进入感受态细胞；

3. SD/-Trp平板检测转化结果。

二、自激活检测

1. 制备不同3-AT浓度梯度的SD/-His/-Trp平板，3-AT的浓度一般设定在50-100 mM之间，并设置不含3-AT的对照；

2. 将上述转化产物稀释到单克隆水平（OD值＜0.002），涂板。

3. 筛选出适宜的3-AT浓度。（如某浓度3-AT平板上的菌落弱小且稀疏，与对照相比差距明显，且延长培养时间也不会再生长，即为理想的3-AT浓度）

三、互作筛选

1. 液体SD/-Trp培养基培养诱饵菌株Y187（pHis2-DNA），制备Y187（pHis2-DNA）感受态细胞；

2. 将pGADT7-cDNA文库转入Y187（pHis2-DNA）感受态细胞；

3. 转化产物涂SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-Trp平板各一块，用以计算转化效率；剩余转化产物全部涂SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X为筛选所得浓度）平板50块（φ150 mm），培养3-5天；

4. 挑取SD/-His/-Leu/-Trp平板上克隆，PCR后（推荐SK2420，菌P法），测序鉴定；

5. 点对点验证。

培养基配制方法：

1. 一袋培养基干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5 L去离子水中溶解（琼脂冷水不溶）。

2. 无调整pH值，121 ℃高压灭菌15 min。

3. 液体培养基封好口避光、室温储存备用。

4. 固体培养基冷却到50 ℃左右倒入平板，室温凝胶，封口倒置4 ℃保存。

3-AT的使用方法：

1.计算所需平板的数量，配制培养基；

2.设置3-AT的浓度梯度；

3.灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55 ℃左右，按设置浓度加入3-AT母液，摇匀后倒板；

4.标记每个平板的3-AT浓度，超净台冷却凝胶后，将转化产物涂板，28-30 ℃培养3-5天。

供应产品目录：

1/2MGY培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母，也称MGAs） 2×500ml

1/2MM培养基（1/2YNB，用于毕赤酵母） 2×500ml

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MDA培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

2×MDH培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL （2×）

2×MD培养基（用于毕赤酵母） 500mL×5 （2×）

5×AP培养基/APD培养基（含葡萄糖，-Ura） 100mL×5

5×AP培养基/APG培养基（含半乳糖，-Ura） 100mL×5

APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMGH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMGY & BMMY基础培养基 10×0.5L

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMGY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMG培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 500ml

BMMY培养基（用于毕赤酵母） 5×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

BMM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MGYH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MGY培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMA培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MMH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

MMMa培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

MM培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

PAD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.5L

RD Agar培养基Kit 10×0.1L

RDH培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RDH培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 2×500ml

RD培养基（用于毕赤酵母） 10×500ml

YPD/YEPD培养基（用于毕赤酵母）（溶液） 2×500ml

YPD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MDA培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母MDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MD培养基 10×0.5L

毕赤酵母MD平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGYH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MGY平板 （9cm）10个

毕赤酵母MMH平板 （9cm）10个

毕赤酵母MM平板 （9cm）10个

毕赤酵母PAD平板 （9cm）10个

毕赤酵母RDH培养基 10×0.5L

毕赤酵母RDH平板 （9cm）10个

毕赤酵母RD培养基 10×0.5L

毕赤酵母RD平板 （9cm）10个

毕赤酵母筛选培养基套装（PichiaPink表达系统） 1Set

刚果红YPD平板（9cm） 10块

缺精氨酸APG培养基（含半乳糖，-Ura） 10×1L

yyp2021.2.22