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产品名称:RSA-FITC;异硫氰酸荧光素(FITC)标记大鼠血清白蛋白;齐岳定制
异硫氰酸荧光素(FITC)标记大鼠血清白蛋白
一、FITC简介
异硫氰酸荧光素(FITC)是一种荧光素衍生物,具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点。其异硫氰酸基团可与蛋白的氨基末端或者伯胺反应,从而实现包括抗体、凝集素在内的蛋白标记。FITC在生物学中应用广泛,常用作蛋白质或多糖的不同底物的标记试剂。
二、FITC标记大鼠血清白蛋白的方法
制备待标记蛋白溶液:
将大鼠血清白蛋白溶于0.1M碳酸钠缓冲液(pH 9.0)中,浓度应达到或超过2mg/ml。
注意:碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液不宜在0-5℃下存放超过一周,因其pH值会发生变化。建议现配现用。待标记的蛋白必须是未被污染的,且溶解蛋白的缓冲液中不能含有叠氮钠或胺类试剂(如Tris、甘氨酸),因为这些试剂会抑制标记反应。
溶解FITC:
将FITC溶解于无水DMSO中,配制成1mg/ml的溶液。
注意:FITC溶液应在标记实验前新鲜配置,并避光保存。
标记反应:
对于1ml蛋白溶液,加入一定量(如50μl)的FITC溶液。可以边加边轻轻搅拌蛋白溶液,以确保FITC均匀分布。
将反应液在4℃下避光孵育一定时间(如8小时),使FITC与蛋白充分反应。
终止反应:
加入NH4Cl,使其终浓度达到50mM,然后在4℃下终止反应2小时。
分离纯化:
通过凝胶过滤层析分离排除未被结合的FITC。选择大小孔径合适的凝胶柱,将反应混合液注入凝胶柱中,然后用PBS缓冲液进行洗脱。
在洗脱过程中,可以形成两条带:一条是快速移动带,即FITC-蛋白偶联物;另一条是慢速移动带,即未结合蛋白的FITC和其他杂质。
产地:西安
纯度:95%以上
状态:固体/粉末/溶液
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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