1、氨基修饰介孔二氧化硅(NH2-MSN)的制备
依据** Stober法制备MSN,在此基础上,本实验改良了** Stober 法,并一步合成NH2-MSN :1.0 g CTAB溶解于480 mL超纯水中,加入3.5 mL 2 mol.L-1NaOH 溶液,80℃恒温搅拌2 h,然后快速加入3 mL TEOS,30 min后缓慢恒速滴入2mL APTES,控制5 min 滴毕,恒温继续反应2 h,反应结束后静置熟化24 h, 15 000 r - min-1离心30min得到白色固体。将离心得到的白色固体分散于200 mL NH4NO3(10 mg .mL-')的乙醇溶液中80 ℃回流4 h,经过6次反复操作去除模板剂CTAB,最后一次离心后真空干燥,得到白色粉末NH,-MSN。采用透射电镜(TEM)分别对MSN、NH2-MSN进行观察,粒径仪测定粒径及Zeta 电位,傅立叶红外光谱仪(FTIR)表征. NH2-MSN 上的修饰氨基。
2、NH2-MSN-RES的制备
本实验设计了反复饱和溶液吸附法来制备NH2 -MSN-RES:称取100 mg NH2-MSN(记为W10)分散到RES饱和乙醇溶液20 mL中,常温25℃避光搅拌,每隔30 min短时超声3 min,搅拌2h使 NH2-MSN充分吸附RES饱和乙醇溶液,然后15 000 r ·min-1离心30 min,将离心得到的白色固体35℃减压干燥后称重(记为W11)﹐然后重复分散、吸附﹑离心、干燥、称重,每重复一次的称重分别记为W12、W13、W14……。同样,称取100 mg NH2-MSN分散到乙醇溶液20 mL中,除了不加入RES 外,其他同法操作,每次称重分别记为W01、W02 、 W03、 W04……,按照相同的方法制备对照组MSN-RES。
3、NH2-MSN-RES体外释放度的测定
称取RES、MSN-RES、NH2-MSN-RES适量(折合RES量10 mg)分散于10 mL的PBS(pH 7.4)缓冲液﹐置于透析袋(截留相对分子质量3500)中,透析夹密封后置于释放介质PBS 中,体积为1000 mL,在37℃下以50 r min-1恒温水浴振荡,平行操作3份。分别于15、30、45、60 min、2、4、6、8、12、24、48 h取l mL透析介质,并补充相应的PBS。取出的透析介质用0.45 um微孔滤膜过滤,续滤液经 HPLC 测定RES浓度,计算累积释药百分率。
4、HPLC色谱条件
色谱柱:SunFire C18 (4.6 mm x 250 mm,5 um);流动相:甲醇水(50:50);柱温:35℃;流速:1.0 mL·min-1 ;检测波长:306 nm;进样量:20 uL。以白藜芦醇的峰面积为纵坐标(Y),其浓度为横坐标(X)进行线性回归,得回归方程为:y=132 917X +776.27,r =0.999 9,表明RES在0.25 ~10 ug· mL-'内线性关系良好。考察其高、中、低3种浓度溶液的日内精密度RSD小于2%,日间精密度 RSD小于3%。
5、NH2-MSN 细胞毒性
取对数生长期Caco-2细胞接种于96孔平底细胞培养板中,密度为1 x105个·mL-1每孔加入190uL培养液培养12 h。然后实验组分别加入不同溶度的MSN和NH2-MSN的混悬液10 uL,**质量浓度分别为0.01、0. 1、0.5、1、5、20、50、100 ug mL-1,空白对照组加入无菌生理盐水,每组每浓度设6个平行孔。培养 24 h后,每孔加入 5 mg ·mL-1的MTT溶液10 uL,微量振荡器上振荡3 ~5min,继续培养4 h,弃上清液,加入DMSO 150 uL,在微量振荡器上振荡10 min,用酶标仪测定570 nm波长处其光密度(A)值。取6个孔平均A值计算细胞的存活率(IC),IC=(实验组A 值/空白对照组A值)×**。
6、NH2-MSN-RES跨膜转运
参考文献建立 Caco-2细胞单层模型。将造模成功的Transwell(美国Corning公司3402型,膜面积1.12 cm2,膜孔径3 um)小室置于12孔嵌套板中,每板分为3 组 ( RES、MSN-RES、NH2-MSN-RES),平行6孔,每组考察含RES为2 ug ·mL-1 3种制剂的转运情况。用预先37℃保温的D-Hanks溶液冲洗3次,跨膜转运AP侧→BL侧时,在 BL室加入1.5 mL空白D-Hanks溶液,使AP室外表面完全浸透,然后在AP室加入1.5 mL含药培养基;跨膜转运BL侧→AP侧时,在BL室中加入1.5 mL含药培养基,AP室加入1.5 mL空白D-Hanks溶液。加入药液后分别于0.5、1、2、4、8、12 h 时从BL或AP室小心取样0.15 mL,并补充0.15 mL的空白D-Hanks。样品经 HPLC测定**浓度,绘制**吸收曲线并计算表观渗透系数Papp,Papp =△Q/(△t· A·P0),△Q为**的累积转运量( ug) ;△Q/At为**转运速率( ug min -1); po为**初始浓度(ug·mL-1) ;A为细胞单层的表面积(cm2)。
MSN凭借其巨大的比表面积可以**提高**的口服生物利用度,而经过氨基修饰的MSN通过与胃肠道表面黏蛋白的相互黏附,更加**促进了**的吸收。同样,实验结果表明MSN和NH2-MSN在较高浓度时具有一定的细胞毒性,一方面是由于其巨大的比表面积与细胞接触时破坏细胞膜的稳定﹐另一方面可能由于制备时模板剂CTAB未能除尽而引起细胞毒性,前者在口服给药中难以避免,因为降低了比表面积也会降低与胃肠道的接触面积而降低吸收,后者可以在后续的研究中改进合成工艺来解决。
西安齐岳生物提供各种定制产品服务。可提供定制二氧化硅,可与其他各种活性基团相连。二氧化硅定制材料、纳米二氧化硅载药、纳米二氧化硅-多肽、纳米二氧化硅-氨基酸、纳米二氧化硅-糖、金属包裹二氧化硅、二氧化硅包裹量子点等等
齐岳供应相关产品:
纳米二氧化硅包裹绿色荧光蛋白
纳米二氧化硅包裹荧光蛋白
纳米二氧化硅包裹组氨酸标签蛋白
蛋白质修饰的介孔二氧化硅纳米粒子
二氧化硅水凝胶蛋白质
二氧化硅粒子表面聚合物/蛋白质混合型分子刷
蛋白质包裹二氧化硅纳米粒
刷状结构的阳离子性接枝微粒SiO2对牛血清白蛋白的吸附
二氧化硅—牛血清白蛋白颗粒
牛血清白蛋白包裹的金纳米簇和四氧化三铁二氧化硅核壳纳米粒子的复合材料
柔性SiO2@C多孔纳米纤维膜
基于人血清白蛋白功能化纳米二氧化硅
羧基功能化介孔二氧化硅纳米载体颗粒(MSNs-COOH)
硫辛酸修饰的介孔氧化硅纳米颗粒
基于介孔二氧化硅的纳米**控释体系
转铁蛋白修饰的二氧化硅荷载白藜芦醇
转铁蛋白修饰的介孔二氧化硅
环糊精修饰SiO2
转铁蛋白-叶酸多重修饰的双靶向介孔二氧化硅包覆金纳米棒
包裹钌联吡啶(RuBpy)羧基修饰的二氧化硅纳米颗粒
包裹荧光染料的二氧化硅纳米颗粒
硅烷偶联剂KH-570对纳米二氧化硅的表面改性
二氧化硅纳米球(gQDs@SiO2)表面修饰链霉亲和素(strAV)
在聚多巴胺修饰的表面构建壳聚糖/介孔二氧化硅肝素缓释涂层
介孔二氧化硅—雷帕霉素—肝素**涂层支架
介孔二氧化硅荧光肝素bFGF
负载肝素和琼脂糖的介孔二氧化硅修饰硅橡胶薄膜
纳米SiO2与尿素修饰大豆7S与11S球蛋白
基于负载过氧化氢酶的介孔二氧化硅粒子
球形二氧化硅修饰上纳米铂颗粒和甲胎蛋白(AFP)抗体
新型二氧化硅微球固定辣根过氧化物酶
固定过氧化氢酶的明胶二氧化硅杂化微球
高稳定性介孔SiO2多层膜负载
苯硼酸修饰的介孔二氧化硅/胰岛素纳米粒
二氧化硅杂化凝胶固定化醇脱氢酶
人血清蛋白功能化纳米二氧化硅
白蛋白和壳聚糖包裹的二氧化硅微球
适配体连接的二氧化硅包裹钌吡啶荧光纳米探针
zl 03.02