shRNA打靶效率检测载体 慢病毒载体（表达含打靶位点的报告基因），定制服务

载体的结构设计

启动子部分，常选用如 U6 启动子，它以其高活性和特异性，有力地驱动 shRNA 的转录起始，确保 shRNA 能够在宿主细胞内稳定且高效地合成。多克隆位点则位于启动子下游，其设计具有高度的灵活性，方便研究人员将针对不同靶基因的 shRNA 序列地插入其中。

核心的含打靶位点的报告基因是此载体的一大特色。例如，以荧光蛋白基因（如绿色荧光蛋白 GFP 基因）为例，在其特定的编码序列区域巧妙地插入了与目标靶基因互补的打靶序列片段。这样一来，报告基因的表达就与靶基因的状态紧密相连。此外，载体两端的长末端重复序列（LTR）是慢病毒整合功能的关键保障，使得载体在进入宿主细胞后能够精确地将携带的 shRNA 与报告基因整合进宿主细胞基因组，实现长期稳定的基因表达调控。同时，为了便于在细胞培养过程中筛选出成功转染的细胞群体，还配备了抗生素抗性基因，如嘌呤霉素抗性基因，确保后续实验在均一性良好的细胞体系中进行。

原理及流程

首先，在实验准备阶段，研究人员根据目标靶基因的序列信息，精心设计并合成特异性的 shRNA 序列，然后将其克隆到慢病毒载体的多克隆位点上，构建成重组慢病毒载体。接着，将重组慢病毒载体与辅助包装质粒一同转染到包装细胞系，如常用的 293T 细胞中。

收集这些慢*颗粒的上清液后，将其用于感染目标哺乳动物细胞。凭借其独特的感染机制，能够高效地将重组载体携带的 shRNA 和含打靶位点的报告基因整合进宿主细胞基因组。在宿主细胞内，shRNA 开始发挥其基因沉默功能，它通过与靶 mRNA 互补配对结合，诱导形成 RNA 干扰复合物（RISC），RISC 进而促使靶 mRNA 降解或者抑制其翻译过程，从而降低靶基因的表达水平。

而含打靶位点的报告基因在细胞内也同时进行表达。由于其序列中嵌入的打靶位点与靶基因的关联性，当靶基因被 shRNA 成功沉默时，会引发细胞内一系列的分子调控变化，进而影响到报告基因的表达情况。例如，如果靶基因是某个信号通路中的负调控因子，其被沉默后可能会激活报告基因的表达，表现为荧光强度的增强或者酶活性的提高。通过先进的检测技术，如流式细胞术检测荧光蛋白的荧光强度变化、酶标仪检测报告基因所编码酶的活性变化等，对比转染了 shRNA 载体的实验组细胞与未转染（阴性对照）或转染了无效 shRNA 序列载体（阳性对照）的对照组细胞之间报告基因表达的差异，就能够精确地计算出 shRNA 对靶基因的打靶效率，从而为基因功能研究、药物研发中的基因沉默策略评估等提供可靠的量化数据。

齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

定制服务：

TPX2基因过表达质粒

U2OS细胞敲除ZNF432基因

USP22截短质粒构建

α-甘露糖苷酶SSc4基因过表达质粒

安全位点基因敲入

靶向PRL-3基因的shRNA慢病毒载体的构建

斑马鱼等模式动物基因敲除模型

报告基因敲入

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2024.04.01