shRNA打靶效率检测载体慢病毒载体（表达shRNA和含有打靶位点的报告基因），定制服务

齐岳生物提供基因敲除细胞定制服务。我们可以根据您的需求，结合靶基因的情况，设计不同的基因敲除方案。例如，移码敲除、片段敲除、多基因敲除等。

工作原理详述

在实验操作流程中，首先根据靶基因的序列信息设计并合成特定的 shRNA 序列，然后将其克隆到检测载体的多克隆位点，构建成重组载体。接着，将重组载体转染到目标细胞中，一般常用的细胞系有 HEK293 细胞、HeLa 细胞等哺乳动物细胞系。

转染后的细胞内，在启动子的驱动下，shRNA 被转录生成。shRNA 随后会在细胞内的核酸酶作用下被加工成具有活性的 siRNA 样分子，这些分子能够与靶 mRNA 特异性互补配对结合。当 shRNA 成功地对靶基因进行打靶作用时，会通过多种机制影响靶 mRNA 的命运，例如诱导其降解或者抑制其翻译过程，从而降低靶基因的表达水平。

由于靶基因与报告基因之间存在着预先设计好的关联或者调控网络，靶基因表达的改变会相应地引起报告基因表达的变化。例如，如果靶基因是某个信号通路中的抑制因子，其被 shRNA 沉默后，可能会解除对报告基因表达的抑制，导致报告基因的表达量增加，表现为荧光强度增强（对于荧光蛋白基因）或者酶活性提高（对于荧光素酶基因）。通过使用特定的检测仪器，如流式细胞仪检测荧光蛋白的荧光强度、酶标仪检测荧光素酶的活性等，对比转染了 shRNA 载体的实验组细胞与未转染（阴性对照）或转染了无效 shRNA 序列载体（阳性对照）的对照组细胞之间报告基因表达的差异，就能够精确地计算出 shRNA 对靶基因的打靶效率。

定制服务：

表达型质粒载体pGEX-4T-2

表达载体构建

病毒包装敲除载体\非病毒敲除载体（Cas9 蛋白可选）

病毒载体构建（慢病毒、腺病毒、AAV）

哺乳动物CRISPR基因编辑载体

哺乳动物CRISPR基因表达调控载体

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

保存：冷藏

厂家：西安齐岳生物

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2024.04.01