叠氮溴化丙锭,化学名为Propidium Monoazide,简称PMA,是一种光反应的DNA结合染料。以下是对其的详细解析:
结构与特性:PMA的结构中包含了一个叠氮基团(Monoazide),这个基团在光照条件下(通常是紫外光或可见光)能够变得高度反应活性,从而与DNA的碱基(主要是鸟嘌呤)发生共价结合。然而,在没有光照的情况下,PMA与DNA的结合能力相对较弱,且不易发生反应。PMA是一种高亲和性的DNA结合染料,该染料本身具有微弱的荧光,但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光,尤其与双链DNA具有高亲和性。
应用:
区分活细胞与死细胞:在微生物群落分析中,PMA常被用来处理样品,以去除死细胞或受损细胞的DNA信号,从而只分析活细胞的DNA。这有助于更准确地评估微生物群落的真实结构和活性。
流式细胞术:在流式细胞术中,PMA可以与荧光染料结合使用,以区分活细胞与死细胞。活细胞由于细胞膜完整,不会被PMA标记,而死细胞则会被PMA标记并随后与荧光染料结合,从而在流式细胞仪上产生可区分的信号。
环境微生物学研究:在环境微生物学研究中,PMA也被用来评估不同环境条件下微生物群落的活性。通过比较处理前后微生物群落的变化,可以了解环境因素对微生物活性的影响。
使用注意事项:
PMA不具有细胞膜渗透性,因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的DNA。
PMA修饰的DNA经蓝光(~464nm)光解后,PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基,与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键,从而导致永久性DNA修饰。该修饰过程会使DNA不溶,并使其在随后的基因组DNA提取过程中与细胞碎片一起丢失,进而阻碍死细胞中目标DNA的PCR扩增。
残留在溶液中未结合的PMA,在强光照射下与水分子反应分解成无交联活性的羟胺化合物,使羟胺不再能够共价结合DNA,从而不影响PCR扩增。
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