质粒转染及观察(细胞培养、分组、转染)

细胞培养

此处以人神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 细胞株为例：

(1) 用 25 cm2 细胞透气培养瓶，含有 10% 胎牛血清和 1% 青链霉素的 DMEM 完全培养基培养 SH-SY5Y 细胞 (培养条件为：37 ℃、5% CO2)。

(2) 每 1～2 天进行换液，细胞长至 80 %～90 % 时传代：

① 用吸管吸出旧的培养基，PBS 清洗 2 次，每次 5 mL，每瓶加入 0.5 mL 胰酶，消化 30～60s。显微镜下观察大部分细胞收缩、变圆，有少许细胞开始掉落时，立即用吸管吸出胰酶，加入 5 mL 培养基吹打终止消化，使细胞从瓶壁上全部脱落，悬浮在培养基中。

② 将细胞悬液转移至 15 mL 离心管中，4 ℃，1000 rpm，离心 5 min。

③ 弃上清，新鲜培养液重悬细胞并轻轻混匀，根据细胞生长密度选择传代瓶数。一周传代 2～3 次。

(3) 细胞冻存时，冻存液成分：70% 培养基，20% 胎牛血清，10% DMSO；冻存密度为 1～2×106 个 /管，液氮保存。

分组

(1) 正常对照组 (C)：正常培养 SH-SY5Y 细胞。

(2) 阴性对照组 (NC)：SH-SY5Y 细胞转染阴性对照质粒。

 (3) 过表达组 (PC)：SH-SY5Y 细胞转染过表达质粒。

转染

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除