CRISPR/Cas9质粒的构建

原理提要

1. 切割区的选择在于PAM序列-NGG；

2. 特异性在于sgRNA的20个碱基；

3. Cas9失活：D10A、H840A突变。

sgRNA设计

1. NGG序列前面，长度20nt左右；

2. GC含量在40-60%之间；

3. 尽量以G碱基开始，最后7个碱基的靶向性要好；

4. 尽量靠近基因编码区的ATG下游，**或第二外显子。

CRISPR/Cas9质粒的构建

1.线性化载体；

2. sgRNA双链结合；

3. sgRNA与载体连接；

4. 菌P鉴定。

基因敲除效果鉴定1.Western检测蛋白表达量；2.双sgRNA敲除，间隔200-500bp左右。鉴定引物设计在两个gRNA外侧。

产品：

单基因/多基因敲除细胞系构建

小片段敲除方案，基因敲除细胞方案

移码敲除方案，基因敲除细胞方案

大片段敲除方案，基因敲除细胞方案

Hep G2细胞敲除PPP1R12B/KCNJ12/FGA基因

HeLa细胞系敲除STING1基因

HCT116细胞系敲除TP53基因

U2OS细胞敲除ZNF432基因

Hep G2细胞敲除SNORD17基因

RAW264.7细胞敲除Pik3r1

HeLa细胞系敲除NSUN2基因

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除