质粒构建的方法及组成元件

质粒载体通常由以下元件组成：

启动子：RNA聚合酶识别和结合的部位，启动外源基因表达。

多克隆位点（MCS）：用于插入外源DNA片段。

荧光蛋白：如绿色、红色荧光蛋白，用于鉴定质粒是否转入细胞及转染效率。

真核抗性基因：如Q弱NEU和BSD，用于筛选表达质粒的细胞。

原核抗性基因：如氨苄和卡纳，用于筛选表达原核抗性的细菌。

GH/SV40 Poly A：转录终止信号。

质粒构建的方法

过表达质粒的构建步骤：

线性化载体：选择合适的内切酶处理载体。

设计引物扩增目的片段：引物需包含与载体同源的序列。

计算连接体系：根据DNA片段使用总量和载体量确定摩尔比，计算所需体积。

连接反应：加入无缝克隆试剂盒试剂，进行连接反应。

转化、筛选与测序：将产物转化大肠杆菌，进行筛选和测序验证。

产品：

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

定制服务:

诱导性基因敲除 定制服务

动物基因编辑

全基因敲除小鼠

全基因敲除cas9

CRISPR/Cas9系统实现基因敲除绝大部分外显子

CRISPR/Cas9系统基因敲除个别外显子

核糖核蛋白（RNP）复合体介导的基因编辑

单碱基编辑、精准碱基编辑

非同源/同源多基因敲除

代谢通路多基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除