利用慢病毒快速构建IPS稳转株，定制服务

西安齐岳生物建立了一种可实现分裂筛选标记的慢病毒稳转系统，能够利用一个筛选标记选择多个转基因，使多基因的共同表达更加简单方便，并能在短时间内完成多基因的稳转细胞系构建。目前，我们已经利用该系统成功获得了稳定表达四种转录因子的诱导性多能干细胞的稳转细胞株。此外，该系统还可以在CRISPR/Cas9基因组编辑中，用于双转基因或双等位基因敲除的阳性细胞选择。

目前，我们已经利用上述系统，成功获得了共表达四种转录因子（Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4）的IPS稳转细胞系。

首先，我们将四种转录因子分成两组分别构建到前面所述的双慢病毒载体中，得到pLent-Ef1a-Oct4-P2A-Sox2-cmv-N-Puro（简称IPS-N-Puro）和pLent-Ef1a-Klf4-P2A-Myc-cmv-C-Puro（简称IPS-C-Puro）的慢病毒质粒。随后将这两个慢病毒质粒共转到293A细胞中，通过Puro筛选，观察细胞生长情况。如下图所示设置实验组与对照组，我们发现在Puro加压后空细胞组细胞大量死亡，而实验组与对照组中细胞存活率较高。这一结果说明，有大量的双慢病毒载体进入了同一细胞中，抗生素基因得到了正常表达，大量细胞得以存活下来。

随后，我们对实验组与对照组细胞中四种转录因子mRNA水平的表达情况进行了定量检测，如下图所示，我们发现实验组细胞中四种转录因子的mRNA表达量都要明显高于GFP对照组，这一结果同样佐证了上述结论，有大量的双慢病毒载体进入了同一细胞中，四种转录因子实现了高表达。

接着，我们将上述两个慢病毒载体分别包装成慢病毒，进行293A细胞的共感染，如下图所示设置实验组和对照组，感染72小时后，加Puro进行筛选，我们发现，空白组细胞（5）和单一慢病毒感染组（2、3）的细胞，出现大量死亡，而“摄取”到双病毒的实验组（1）和GFP组（4），细胞存活率明显高于两病毒单独感染组，在筛选一周后我们成功获得了大量稳转株细胞。

服务：

质粒载体介导的表达ERCC1shRNA的质粒构建

用于植物多基因表达载体构建的质粒系统

通用真核质粒表达载体的构建

麦胚凝集素(WGA)慢病毒载体的构建

构建慢病毒或者腺病毒质粒

pLenti-Puro - 基因载体质粒

CRISPR/Cas9质粒

质粒构建和克隆

基因过表达质粒

shRNA干扰质粒

shRNA干扰对照质粒

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除