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慢病毒载体的来源及结构,构建慢病毒表达载体
发布时间:2024-12-13     作者:axc   分享到:

慢病毒载体的来源及结构,构建慢病毒表达载体

慢病毒载体的来源

慢病毒属(lentivirus)在分类上属于逆转录病毒科,包括8种能够感染人和脊椎动物的病毒,原发感染的细胞以淋巴和巨噬细胞为主,导致感染个体发病。

慢病毒载体的结构

1)野生型HIV-1的基因结构

作为慢病毒载体的改造基础,我们首先了解一下野生型HIV-1的基因结构。HIV-1病毒基因组是由两条正链的RNA组成,长度约为9Kb左右,两端是长末端重复序列(LTR),两个LTR之间的序列为编码蛋白的序列,由9个基因所构成(图2)。

慢病毒载体的来源及结构,构建慢病毒表达载体

9个基因按照编码的蛋白重要性不同,可以分成三类

◆  编码三种主要病毒结构蛋白的基因:gag、pol和env。gag基因编码病毒的核心蛋白如核衣壳蛋白、内膜蛋白和衣壳蛋白;pol基因编码病毒复制相关的酶;env基因编码病毒包膜糖蛋白。

◆  编码两个调节蛋白的基因:tat、rev。rev主要参与蛋白调节的表达水平,tat参与蛋白转录的控制,与病毒的长末端重复序列(long terminalrepeats,LTRS)结合后促进病毒的所有基因的转录。

◆  编码四个辅助蛋白的基因:vif、vpr、vpu、nef。在HIV-1的基因组结构上,还含有病毒生命史所需要的其他序列结构,例如病毒复制和包装等所需要的信号等。


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(1)过表达质粒构建;

(2)诱导基因的定点突变;(单碱基突变,多碱基突变)

(3)构建基因截短体质粒;

(4)亚克隆质粒构建;

(5)通过慢病毒介导的基因过表达;

(6)通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

(7)通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除


注意事项:

本产品仅供科研使用,严禁用于人体或其他非科研用途。

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