慢病毒＆CRISPR/Cas9文库（全基因组文库）

CRISPR/Cas9技术源自Ⅱ型CRISPR/Cas系统，Cas9是一种核酸内切酶，双tracrRNA:crRNA设计成为单向导序列（sgRNA），其5’端的20个核苷酸序列通过碱基互补配对原则与靶位点的DNA结合，3’端与Cas9蛋白结合。sgRNA与DNA靶序列特异性结合，使Cas9能够在特异性位点使靶细胞基因组DNA双链断裂（如图1）。随后，靶细胞通过非同源端连接产生InDels，实现基因敲除；或提供dsDNA供体模板通过同源重组修复的方法实现基因的定点突变或是基因插入。对Cas9蛋白关键活性位点D10A和H840A进行突变后，使Cas9丧失催化活性但不影响其与目标DNA序列结合的能力。这种突变的Cas9蛋白被称为dCas9，可应用于CRISPR激活（CRISPRa：dCas9与单个转录激活因子VP64连接可激活目的基因），亦可用于CRISPR干扰 (CRISPRi：dCas9与转录抑制子KRAB融合后结合到靶基因TSS位点抑制转录起始，沉默靶基因的表达) 。

CRISPR/Cas9全基因组敲除文库筛选鉴定出MAPK通路中的SHP2是茶叶素诱导细胞凋亡的关键靶点。细胞热位移实验(CETSA)和表面等离子体共振(SPR)实验进一步证实了SHP2与茶叶素直接结合。通过SHP2敲低或药理抑制SHP2/SOS1/MAPK通路明显减弱了茶叶素诱导的细胞凋亡和自噬抑制。

服务：

再生蛋白 Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒

重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4

真核表达质粒载体pcDNA3.1

pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒

MCF-7细胞过表达线粒体融合素基因-2(Mfn2)

IGF-1过表达质粒

弓形虫Hsp90基因敲除转染质粒(Hsp90-5'UTR-3'UTR-PBLE-pBluescript)

过表达质粒SAG1-Hsp90-pTCY

Hsp90-pTCY过表达质粒

弓形虫热休克蛋白(Hsp90)敲除质粒及过表达质粒

角蛋白支架联合转化生长因子-β3(TGF-β3)基因过表达载体质粒

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除