慢病毒载体构建及包装流程

慢病毒载体，指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平地表达效应分子。

慢病毒包装系统包括：2个包装质粒以及1个转移质粒，将这些质粒共转染包装细胞。2个包装质粒分别为：Gag/Pol表达质粒和Rev表达质粒。

1、慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR从模板（CDNA质粒或者文库）中调取目的基因CDS区，连入T载体；将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。

2、慢病毒干扰质粒载体的构建合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体

3、慢病毒载体的包装与浓缩纯化制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，4种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后18h 更换为完全培养基，换液30h后，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

服务：

MDM2截短体真核表达载体

猪TRIM56全长及其截短体真核表达质粒的构建

截短型重组质粒的构建

USP22截短质粒构建

METH1基因截短体的构建

小鼠IL-4截短型基因真核表达质粒的构建

构建Tiam1基因的截短体原核表达重组质粒

截短型BAP31/GST基因重组质粒的构建

蛋白截短体编码基因构建到真核表达载体上得到的重组质粒

重组Rab8截短体蛋白

去泛素化酶OTUD6B截短体小鼠模型构建

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除