CRISPR/Cas9技术实现荧光蛋白的基因敲入

CRISPR/Cas9基因编辑技术通过细胞内源同源定向修复（HDR）路径在特定位点精准插入DNA，为基因组修改提供了高效手段。本文的方法针对小鼠RAW 264.7巨噬细胞，利用CRISPR/Cas9与Neon转染系统实现荧光蛋白的内源性敲入，克服了巨噬细胞特殊的转染难度。

方法亮点

该方法通过CRISPR/Cas9技术实现荧光蛋白的内源性敲入，确保了标记蛋白在所有内源性调控下的表达，提高了研究的准确性和生物学相关性。

‍‍‍‍‍‍使用Neon转染系统对RAW 264.7巨噬细胞进行操作，解决了巨噬细胞难以转染的问题，提高了转染效率和细胞存活率。使用单细胞排序和条件培养介质的培养方法，从单个细胞培育出编辑后的克隆细胞系，为精确的基因功能研究提供了可靠的细胞模型。

应用

单细胞基因表达动态研究

通过内源性标记的荧光蛋白，本方法允许在单细胞水平上精确追踪基因表达的动态变化，有助于揭示细胞在不同生理和病理状态下的基因调控机制。‍‍‍

药物筛选与毒理学研究

通过对特定基因进行内源性标记，可以评估药物或化学物质对这些基因表达及其编码蛋白功能的影响，有助于药物开发和毒理学评估。‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍

疾病模型的构建与研究

在巨噬细胞等免疫细胞中内源性敲入疾病相关基因，可以构建用于研究各种疾病（如感染性疾病、自身免疫疾病等）机制的细胞模型。

西安齐岳生物可提供的质粒构建服务包括：

（1）过表达质粒构建；

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

（4）亚克隆质粒构建；

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除

注意事项：

本产品仅供科研使用，严禁用于人体或其他非科研用途。

使用过程中请佩戴手套和护目镜等防护用品，避免直接接触皮肤和眼睛。

请按照相关文献和相关安全规定进行操作，避免误用或滥用。如有侵权，可联系我们删除