牛乳过敏是一种常见的食物过敏反应。在导致牛乳过敏反应的蛋白中，β-乳球蛋白（β-LG）被认为是主要的过敏原。采用共价修饰技术降低β-LG抗原性已成为国际乳制品加工技术研究的。但常用共价修饰手段如糖基化、磷酸化等随机修饰，存在修饰位点选择性低、稳定性不理想、修饰产物不均一等问题。研究表明β-LG抗原性同时受线性表位和构象表位影响，共价修饰发生在不同位点会对蛋白构象及抗原性产生不同影响。为明晰不同位点共价修饰对β-LG抗原性的影响，实现共价修饰对β-LG抗原性的调控，需采用定点修饰技术以制备均一化修饰产物。

在PEG蛋白修饰常用基团中，巯基因其含量少成为PEG定点修饰中的理想位点，目前针对β-LG巯基使用PEG定点修饰的鲜见报道。并且β-LG第121位半胱氨酸（Cys121）游离巯基位于被97%人血清识别的主要抗原表位肽段AA102-124中，游离巯基或是探究不同结合位点对β-LG抗原性影响及实现β-LG致抗原性调控的关键位点。

因此，针对β-LG Cys121游离巯基，选择5 kDa单甲氧基聚乙二醇-马来酰亚胺（mPEG-MAL）对其进行定点修饰（图1），以期获得高修饰率β-LG PEG定点修饰产物，并对修饰前后β-LG抗原性进行探究。

修饰前后β-LG抗原性分析

研究显示PEG修饰能降低蛋白免疫原性，然而本实验经mPEG-MAL对β-LG Cys121游离巯基定点修饰后，β-LG-MAL抗原性**提高约25.9%，如图2所示。本团队前期采用PEG定点修饰β-LG谷氨酰胺残基得到产物β-LG-NH2，β-LG-NH2抗原性**下降59.04%；对β-LG的N-末端氨基进行修饰得到β-LG-ALD，β-LG-ALD抗原性**下降53.8%，该2 种位点修饰使蛋白抗原性下降原因都归结于PEG链对于蛋白的空间屏蔽作用，掩盖了β-LG表面部分抗原决定簇。

图2

本实验中，PEG的巯基定点修饰却没有因PEG链的屏蔽使抗原性下降，说明结合位点对β-LG抗原性的影响较PEG链的屏蔽作用更为**。β-LG中肽段AA41-46、AA102-124和AA149-163为主要抗原表位，分别为92%、97%、89%的人血清识别。实验中Cys121游离巯基位于被97%人血清识别的主要抗原表位肽段AA102-124中，并且由于β-LG致敏性同时受线性表位和构象表位影响，因此可能是修饰后原处于蛋白内部的致敏位点暴露，或者有新的构象致敏表位形成导致β-LG致抗原性**提升。

齐岳生物拥有种类齐全的PEG衍生物，包括：NHS-PEG，马来酰亚胺PEG，巯基PEG，氨基PEG，叠氮PEG，DSPE PEG，荧光PEG等。为全世界数以百万计的客户提供产品与服务。修饰性PEG可应用于**输送、医疗设备改造和诊断分析等领域。Nanocs提供从磷脂PEGs到荧光PEGs的多种选择，种类齐全，产品线丰富。

羟基-聚乙二醇-乙酸OH-PEG-AA

烯基-聚乙二醇-羟基ALKENE-PEG-OH

羟基-聚乙二醇-聚酰亚胺OH-PEG-PI

羟基-聚乙二醇-聚己内酯OH-PEG-PCL

羟基-聚乙二醇-琥珀酸OH-PEG-SA

芴甲氧羰酰基-亚氨基-聚乙二醇-羟基 Fmoc-NH-PEG-OH

叔丁氧羰基-亚氨基-聚乙二醇-羟基Boc-NH-PEG-OH

单硬脂酸-聚乙二醇-羟基STA-PEG-OH

磷脂(钠盐)-聚乙二醇-羟基DSPE(Sodium salt)-PEG-OH

胆固醇-聚乙二醇-羟基CLS-PEG-OH

二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羟基DSPE-PEG-OH

羟基-聚乙二醇-荧光素OH-PEG-FAM

罗丹明B-聚乙二醇-羟基RB-PEG-OH

荧光素-聚乙二醇-羟基FITC-PEG-OH

羟基-聚乙二醇-乙酸+C30成酯OH-PEG-AA-C30

硅烷-聚乙二醇-酰肼Silane-PEG-HZ

丙烯酸酯-聚乙二醇-酰肼AC-PEG-HZ

硫辛酸-聚乙二醇-酰肼LA-PEG-HZ

对甲苯磺酸基-聚乙二醇-酰肼Tosylate-PEG-HZ

乙酰硫基-聚乙二醇-酰肼Acetylthio-PEG-HZ

氨基氧基-聚乙二醇-酰肼Aminooxy-PEG-HZ

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-酰肼NPC-PEG-HZ

琥珀酰亚胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-酰肼SAS-PEG-HZ

琥珀酰亚胺碳酸酯-聚乙二醇-酰肼SC-PEG-HZ

琥珀酰亚胺乙酸酯-聚乙二醇-酰肼SCM-PEG-HZ

琥珀酰亚胺戊二酸酯-聚乙二醇-酰肼SG-PEG-HZ

琥珀酰亚胺琥珀酯-聚乙二醇-酰肼SS-PEG-HZ

琥珀酰亚胺戊酸酯-聚乙二醇-酰肼SVA-PEG-HZ

环氧化物-聚乙二醇-酰肼Epoxides-PEG-HZ

戊酸-聚乙二醇-酰肼VA-PEG-HZ

丙烯酰胺-聚乙二醇-酰肼Acrylamide-PEG-HZ

溴化物-聚乙二醇-酰肼Br-PEG-HZ

乙烯磺酸酯-聚乙二醇-酰肼VS-PEG-HZ

甲基丙烯酸酯-聚乙二醇-酰肼Me-PEG-HZ

碘代乙酰基-聚乙二醇-酰肼IA-PEG-HZ

氯化物-聚乙二醇-酰肼Chloride-PEG-HZ

二苯基环辛炔-聚乙二醇-酰肼DBCO-PEG-HZ

反式环辛烯-聚乙二醇-酰肼TCO-PEG-HZ

四嗪-聚乙二醇-酰肼Tetrazine-PEG-HZ

叶酸-聚乙二醇--酰肼Folate-PEG-HZ

胆固醇酯-聚乙二醇--酰肼CHEMS-PEG-HZ

巯基-聚乙二醇-酰肼SH-PEG-HZ

叔丁氧羰基氨基-聚乙二醇-醛基Boc-NH-PEG-CHO

聚己内酯-聚乙二醇-醛基PCL-PEG-CHO

醛基-聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯基CHO-PEG-SC

碘乙酰基-聚乙二醇-硫辛酸IA-PEG-Lipoic acid

氯化物-聚乙二醇-硫辛酸Chloride-PEG-Lipoic acid

氮杂二苯并环辛炔-聚乙二醇-硫辛酸DBCO-PEG-Lipoic acid

环辛烯-聚乙二醇-硫辛酸TCO-PEG-Lipoic acid

四嗪-聚乙二醇-硫辛酸Tetrazine-PEG-Lipoic acid

胆固醇酯-聚乙二醇-硫辛酸CHEMS-PEG-Lipoic acid

羧基-聚乙二醇-羟基COOH-PEG-OH

活性酯-聚乙二醇-羟基NHS-PEG-OH

炔基-聚乙二醇-羟基AlKyne-PEG-OH

巯基-聚乙二醇-羟基HS-PEG-OH

生物素-聚乙二醇-羟基Biotin-PEG-OH

酰肼-聚乙二醇-羟基HZ-PEG-OH

硅烷-聚乙二醇-羟基Silane-PEG-OH

丙烯酸酯基-聚乙二醇-羟基AC-PEG-OH

硫辛酰胺-聚乙二醇--羟基LA-PEG-OH

对甲苯磺酸-聚乙二醇-羟基Tosylate-PEG-OH

乙酰硫基-聚乙二醇-羟基Acetylthio-PEG-OH

氨基氧基-聚乙二醇-羟基Aminooxy-PEG-OH

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-羟基NPC-PEG-OH

琥珀酰亚胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-羟基SAS-PEG-OH

羟基-聚乙二醇-琥珀酰亚胺羧甲基酯OH-PEG-SCM

琥珀酰亚胺戊酸酯-聚乙二醇-羟基SVA-PEG-OH

环氧化物-聚乙二醇-羟基Epoxides-PEG-OH

戊酸-聚乙二醇-羟基Valeric Acids-PEG-OH

丙烯酰胺-聚乙二醇-羟基ACA-PEG-OH

溴基-聚乙二醇-羟基Br-PEG-OH

乙烯砜-聚乙二醇-羟基VS-PEG-OH

甲基丙烯酸酯基-聚乙二醇-羟基MA-PEG-OH

碘酸盐-聚乙二醇-羟基IA-PEG-OH

氯化物-聚乙二醇-羟基Chloride-PEG-OH

氮杂二苯并环辛炔-聚乙二醇-羟基DBCO-PEG-OH

环辛烯-聚乙二醇-羟基TCO-PEG-OH

四嗪-聚乙二醇-羟基Tetrazine-PEG-OH

叶酸-聚乙二醇-羟基FA-PEG-OH

胆固醇酯-聚乙二醇-羟基CHEMS-PEG-OH

甲氧基聚乙二醇-羟基mPEG-OH

羟基-聚乙二醇-乙酸叔丁酯OH-PEG-CH2COOtBu

乙酰基巯基-聚乙二醇-羟基S-Acetyl-PEG-OH

多巴胺-聚乙二醇-羟基DA-PEG-OH

聚赖氨酸-聚乙二醇-羟基PLL-PEG-OH

聚(乳酸-共-乙醇酸)-聚乙二醇-羟基PLGA(10K)-PEG-OH

羟基-聚乙二醇-丙酸OH-PEG-PA

N-(3-羟丙基)酞亚胺-聚乙二醇-羟基N-(3-hydroxypropyl) phthalimide-PEG-OH

苄基-聚乙二醇-羟基Benzyl-PEG-OH

6-硝基多巴胺-聚乙二醇-羟基6-NO2DA-PEG-OH

胆固醇-聚乙二醇-有机硅CLS-PEG-Silane

二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硅烷DSPE-PEG-Silane

荧光素-聚乙二醇-三乙氧基硅烷FITC-PEG-Silane

氮杂二苯并环辛炔-聚乙二醇-丙烯酸酯DBCO-PEG-AC

缩水甘油基-聚乙二醇-丙烯酸酯基AC-PEG-EPO

丙烯酸酯基-聚乙二醇-甲基丙烯酸酯基AC-PEG-MA

丙烯酸酯-聚乙二醇-精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸AC-PEG-RGD

丙烯酸酯基-聚乙二醇-叠氮基AC-PEG-N3

二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-丙烯酸酯DSPE-PEG-AC

荧光素-聚乙二醇-丙烯酸酯FITC-PEG-AC

胆固醇酯-聚乙二醇-丙烯酸酯CHEMS-PEG-AC

硫辛酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Lipoic acid-PEG-Acrylates

对甲苯磺酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Tosylate-PEG-Acrylates

乙酰巯基-聚乙二醇-丙烯酸酯Acetylthio-PEG-Acrylates

氨氧基-聚乙二醇-丙烯酸酯Aminooxy-PEG-Acrylates

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-丙烯酸酯NPC-PEG-Acrylates

琥珀酰亚胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-丙烯酸酯SAS-PEG-Acrylates

戊酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Valeric Acids-PEG-Acrylates

丙烯酰胺-聚乙二醇-丙烯酸酯Acrylamide-PEG-Acrylates

溴基 -聚乙二醇-丙烯酸酯Bromide-PEG-Acrylates

乙烯磺酸酯-聚乙二醇-丙烯酸酯VS-PEG-Acrylates

碘代乙酰基-聚乙二醇-丙烯酸酯IA-PEG-Acrylates

氯化物-聚乙二醇-丙烯酸酯Chloride-PEG-Acrylates

反式环辛烯-聚乙二醇-丙烯酸酯TCO-PEG-Acrylates

四嗪-聚乙二醇-丙烯酸酯Tetrazine-PEG-Acrylates

叶酸-聚乙二醇-丙烯酸酯Folate-PEG-Acrylates

叶酸-聚乙二醇-硫辛酸FA-PEG-LA

琥珀酰亚胺戊二酸酯-聚乙二醇-硫辛酸SG-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亚胺琥珀酯-聚乙二醇-硫辛酸SS-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亚胺乙酸酯-聚乙二醇-硫辛酸SCM-PEG-LA

琥珀酰亚胺碳酸酯基-聚乙二醇-硫辛酸SC-PEG-Lipoic acid

荧光素-聚乙二醇-硫辛酸FITC-PEG-LA

硫辛酸-聚乙二醇-三甲基溴化铵LA-PEG-NMe3+Br-

对甲苯磺酸-聚乙二醇-硫辛酸Tosylate-PEG-Lipoic acid

乙酰硫基-聚乙二醇-硫辛酸Acetylthio-PEG-Lipoic acid

氨氧基-聚乙二醇-硫辛酸Aminooxy-PEG-Lipoic acid

硝基苯基碳酸酯-聚乙二醇-硫辛酸NPC-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亚胺酰胺琥珀酸-聚乙二醇-硫辛酸SAS-PEG-Lipoic acid

琥珀酰亚胺戊酸酯-聚乙二醇-硫辛酸SVA-PEG-Lipoic acid

环氧化物-聚乙二醇-硫辛酸Epoxides-PEG-Lipoic acid

戊酸-聚乙二醇-硫辛酸Valeric Acids-PEG-Lipoic acid

溴化物-聚乙二醇-硫辛酸Bromide-PEG-Lipoic acid

乙烯砜-聚乙二醇-硫辛酸VS-PEG-Lipoic acid

甲基丙烯酸酯-聚乙二醇-硫辛酸Methacrylate-PEG-Lipoic acid

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