RGD-全氟化碳纳米乳MRI显影剂的制备步骤

纳米乳作为一种新型的纳米材料，具有良好的生物相容性、细胞跨膜运输能力，可应用于**的诊断以及作为**载体。全氟化碳(PFCs)纳米乳作为19F MRI示踪剂已经被广泛应用。全氟溴辛烷(PFOB)是一种无毒性的PFCs，可提供较强的F信号，更是被广泛应用于检测**细胞、组织以及对活体**的19F MRI成像。另外，PFOB对Xe具有较好的溶解性，氙气是一种理想的介质，因为它是一种惰性，无毒的气体，在人体内没有背景信号。129Xe的天然丰度为26.4％，可通过自制的极化装置产生超极化129Xe气体。将超极化的129Xe与CEST技术相结合可达到超高的灵敏度，较低可在皮摩尔浓度下检测到129Xe造影剂。使用全氟溴辛烷(PFOB)作为129Xe的载体，它具有生物相容性好、无毒、体内代谢快等优点，PFOB纳米乳作为129Xe/19F双通道多功能显影剂，具有超高的灵敏度用于129Xe MRI以及19F MRI成像。制备方法简单、材料易得有较好的生物相容性，可以应用于生物体内的核磁共振成像。

本文在于克服现有技术的不足，目的是在于提供一种RGD-全氟化碳纳米乳MRI显影剂及其制备方法和应用；本文提供的PFOB纳米乳结合了129Xe MRI和19F MRI两种磁共振成像方法，并且引用RGD配体与**细胞上的受体特异性结合的靶向诊断的策略，使纳米乳选择性的识别**细胞。通过129Xe MRI和19F MRI技术实现对肺****的靶向诊断。该显影剂有超高灵敏度以及较好的生物相容性。该纳米乳制备方法简单，原料便宜易得，适合用于体内磁共振成像。

包括如下步骤：

(1)纳米乳的制备：先将占磷酸盐缓冲液4wt％的磷脂和占磷酸盐缓冲液0.5wt％的普朗尼克F-68溶解在1ml磷酸盐缓冲液(PBS)中，然后将占磷酸盐缓冲液10wt％-20wt％的全氟溴辛烷(PFOB)加入到上述缓冲液中，并在超声仪中处理5-10分钟，再用试管振荡器振荡10-15分钟，得粗乳液；之后将制备的粗乳液用去离子水稀释20倍，再通过微孔滤膜挤制2次，得到纳米乳记为NPs；

(2)RGD-纳米乳的制备：将胆固醇-PEG2000-RGD加入到步骤(1)制备的纳米乳液中，然后置于摇床上以300rpm的速度振荡1小时得到靶向纳米乳NPs-RGD；

(3)荧光标记的RGD纳米乳的制备：向步骤(2)制备的靶向纳米乳中加入浓度为5mg/mL的荧光染料DiI，然后置于摇床上以300rpm的速度振荡1小时，得到DiI标记的RGD-纳米乳。

优选的，所述胆固醇-PEG2000-RGD的制备方法为：将胆固醇-PEG2000-Mal与RGDyc按摩尔比10:1-1:1加入1ml PBS中，室温下置于摇床上以300rpm的速度振荡20-24小时，然后用透析袋在超纯水中透析去除未反应的RGDyc分子，经冷冻干燥机冻干得到靶向分子胆固醇-PEG2000-RGD。

优选的，所述磷脂为大豆卵磷脂(Lipoid S75)。

优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为5mM，pH为7.4。

优选的，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。

优选的，所述胆固醇-PEG2000-RGD的加入量与磷脂的摩尔比为1：20。

优选的，步骤(1)中磷脂与F-68的质量比为8：1。

优选的，所述磷脂与全氟溴辛烷(PFOB)的质量比为1:2.5-1:5。

另外，本文还要求保护由所述方法制备得到的RGD-全氟化碳纳米乳MRI显影剂以及该显影剂应用于肺****的早期MRI诊断。

与现有技术相比，本文具有以下的明显有益效果：

(1)本文使用S75磷脂做膜材料，用胆固醇-PEG2000-RGD分子进行修饰，采用超声和振荡的方法制备纳米乳，其中F-68的添加可以使微乳结构更加稳定，材料便宜易得，制备方法简单并具有良好的生物相容性；

(2)本文制备的纳米乳同时作为129Xe MRI和19F MRI显影剂以及光学成像显影剂，是一种129Xe/19F双通道、双模态MRI显影剂；

(3)作为129Xe Hyper CEST显影剂，本文纳米乳具有超高的灵敏度高，可在皮摩尔浓度下对肺**细胞进行MRI成像。通过129Xe MRI和19F MRI以及光学成像证明了该纳米乳对肺****具有较好的靶向性，该显影剂可以应用于肺****的早期MRI诊断。

产品供应：

右旋糖酐-二乙烯三胺五乙酸-钆离子螯合物

Dextran-DTPA-Gd显影剂

Gd-EOB-DTPA显影剂

氧化铁微颗粒(MPIOs)MRI显影剂

活化PⅡb/Ⅲa配体MRI显影剂

肝素标记超顺磁氧化铁粒子(HepSPIO)

葡聚糖包裹的超顺磁性Fe3O4纳米颗

稀土化合物核磁共振成像(MRI)

树状大分子CT/MRI双模态成像造影剂

锰螯合物磁共振成像(MRI)

两亲性**靶向性MRI造影剂中间体

Mn3O4/mSiO2纳米粒子MRI造影剂

含有邻二酚羟基的类EDTA配体和非钆磁共振造影剂

非钆顺磁性金属配合物磁共振造影剂

非钆金属簇集体磁共振造影剂

Gd(Ⅲ)Mn(Ⅱ)配合物磁共振成像造影剂

MRI顺磁性造影剂Gd-DTPA

含硝基咪唑基的水溶性磁共振成像造影剂

含金属两亲配合物的顺磁性固体脂质纳米颗粒(pSLN)

含D-半乳糖基的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂

肝靶向性磁共振成像造影剂

高分子/磁性纳米颗粒复合微囊—声/磁双重显影剂

(SPIO)超顺磁性氧化铁显影剂

T1显影剂钆螯合物GD-DTPA

Hab18-SPIO磁共振造影剂

靶向人肝细胞肝**表面抗原Hab18g

T2核磁共振影像MRI

含有超顺磁性氧化铁奈米粒子rABL

荧光金纳米簇磁共振和荧光成像造影剂

标记乳糖基白蛋白SPIO磁共振肝细胞受体显影剂

标记乳糖基白蛋白的超顺磁性氧化铁粒子(LAC-HSA-SPIO)

氧化铁基顺磁性/伪顺磁性纳米颗粒MRI T1显影剂

含磺胺基的顺磁性金属配合物磁共振成象造影剂

6-(1,3-二氧代异吲哚啉)己酸磁性纳米粒子核磁共振成像

含硝基咪唑的Gd(Ⅲ)/99mTc(Ⅴ)配合物造影剂

含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂

包含CEST活性的顺磁性配合物MRI造影剂

顺磁性聚膦腈纳米管磁共振造影剂

顺磁性聚膦腈纳米管Gd-PZSNTMRI造影剂

顺磁性磁共振造影剂礼-二乙烯二胺五乙酸(Gd-DTPA

超顺磁性氧化铁/Gd-DTPA

含钆(Gadolinium)显影剂

顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂

新型靶向液态氟碳纳米乳超声造影剂

眼底荧光血管造影

载吲哚菁绿超声微泡造影剂/ICG-PLGA

钆的螯合物磁共振造影

钆双胺磁共振造影

欧乃影磁共振造影

钆塞酸二钠磁共振造影

普美显磁共振造影

钆贝葡胺磁共振造影

莫迪司磁共振造影

线性造影剂

大环类造影剂

离子型造影剂

非离子型造影剂

PEG-PAMAMs修饰谷氨酸缀合的Fe3O4纳米颗粒

β-环糊精/聚氨酯复合材料

FR-HCPT-PNPCA喜树碱前药

半乳糖多聚赖氨酸(Gal-PLL)

USPIOswithFunctionalizedSurfaces造影剂

T1/T2造影剂脂质体定制服务

Gd磁共振钆T1造影剂脂质体

14:0PE-DTPA(Gd)，磷脂偶联钆

DSPE-DTPA-Gd-DSPE造影剂

DPPE-DTPA-Gd-DPPE造影剂

DMPE-DTPA-Gd-DMPE造影剂

Silica-coatedGd(DOTA)，钆修饰二氧化硅

HA-DOTA-Gd，透明质酸修饰钆造影剂

Biotin-Gd-DOTA，生物素修饰的钆

DOTA-Gd-peptide，钆修饰多肽

pDHPMA-Cy5.5-DOTA-Gd

PAMAM-PEG-DOTA-Gd；树枝状钆化合物

DMPE-DTPA-Gd

Gd-DOTA-PLGA造影剂

Gd-p-SCN-Bn-DOTA，钆-大环配体

Gd-BSA-FITC，钆-牛血清白蛋白-绿色荧光素

Gd-BSA，钆-牛血清白蛋白

Gd-DTPA/Gado-DTPA造影剂

FA-PEG-PAMAM-Cur叶酸接枝姜黄素PAMAM树枝状大分子

靶向大分子造影剂(FA-PEG-PAMAM-Gds)

RGD多肽修饰二氧化硅纳米粒

肽-DOTA探针分子DOTA-EM7

PEG修饰重组腺病毒PLGA超声造影剂

荧光标记介孔二氧化硅磁颗粒（FITC-SiO2@Fe3O4）mesoporoussilica/Fe3O4Magneticnanoparticles,FITCfunction

CarboxylicFunctionalMesoporousSio2microspheres（50nm）羧基化介孔二氧化硅微球

大孔径介孔二氧化硅纳米粒子Mesoporoussilicamicrosphereswithlargeporesize

包裹四氧化三铁T2造影剂脂质体定制

磁共振钆T1造影型脂质体定制

超小氧化钆点缀的介孔二氧化硅

四苯基乙烯-2钆(TPE-2Gd)

上述产品齐岳生物均可供应，仅用于科研，不可用于人体实验！

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