荧光染色原理及免疫荧光染色简介

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

免疫荧光染色：细胞膜上或细胞内的抗原分子与相应的荧光素标记McAb（单克隆抗体）作用一定时间后形成带有荧光素的抗原抗体复合物，经激光激发后发出特定的荧光，其荧光强度与被测定抗原分子含量呈比例关系，由此可求得被测细胞与标记McAb（单克隆抗体）相对应抗原的表达量和阳性细胞百分比。

常用的荧光染料：

绿色荧光：FITC（异硫氰酸荧光素）、 Alexa Fluor 488和GFP；

红色荧光：TRITC（罗丹明）、Cy3（花菁）、Alexa Fluor 568&594和MitoTrackerRed；

蓝色荧光：Hoechst、DAPI；

黄色荧光：YFP、Fluo-3和Rhoda-minel23

不同荧光素经激光激发后其发射荧光光谱有差别，因而可将其用于标记不同的McAb（单克隆抗体）进行单色或多色免疫荧光染色。目前，流式细胞术有单色、双色、三色、四色、五色荧光分析，对细胞的分析更加精密、深入。

免疫荧光染色常用方法：

直接免疫荧光法：用一种（单色）或者多种（多色）荧光素标记的McAb（单克隆抗体）染色细胞后测量其荧光强度和阳性细胞数。

间接免疫荧光法：用一种McAb（单克隆抗体）与细胞作用后，洗去未结合McAb，再加入荧光素标记的**抗体（如羊抗鼠IgG-FITC），染色细胞后测量其荧光强度及阳性细胞数。