CY5-NHS,CAS:1032678-42-4,活性酯CY5荧光染料的使用方法
CY5 - NHS 是一种活性酯形式的近红外荧光染料,常用于标记生物分子,以便在生物医学研究中进行荧光检测和成像。它能与生物分子中的氨基发生反应,实现共价连接,从而赋予生物分子荧光特性。
组成结构
CY5 - NHS 由 CY5 菁染料核心和 N - 羟基琥珀酰亚胺酯(NHS 酯)组成。CY5 具有共轭的多烯链连接两个含氮杂环的结构,这种共轭体系赋予其近红外荧光特性,最大激发波长约为 649nm,最大发射波长约为 670nm。NHS 酯通过共价键连接在 CY5 分子上,NHS 酯中的羰基碳原子具有较高的反应活性,能与氨基发生反应形成酰胺键。
使用方法
准备工作
样品准备:将要标记的生物分子(如蛋白质、核酸等)溶解在合适的缓冲液中,确保缓冲液的 pH 值在 7.2 - 8.5 之间,因为此 pH 范围有利于 CY5 - NHS 与氨基的反应。常用的缓冲液有磷酸盐缓冲液(PBS)、硼酸盐缓冲液等。
染料准备:将 CY5 - NHS 溶解在无水有机溶剂(如二甲基亚砜,DMSO)中,配制成一定浓度的储备液。注意要现用现配,避免染料长时间暴露在空气中而失活。
标记反应
混合:将适量的 CY5 - NHS 储备液缓慢加入到生物分子溶液中,轻轻混匀。通常按照生物分子与 CY5 - NHS 的摩尔比为 1:5 - 1:20 的比例进行添加,具体比例可根据实验需求进行调整。
反应:将混合溶液在室温下避光反应 30 分钟 - 2 小时,期间可适当振荡或搅拌,以促进反应充分进行。
终止反应
反应结束后,加入适量的含有氨基的封闭剂(如甘氨酸),以消耗未反应的 CY5 - NHS,终止反应。
纯化
采用合适的方法对标记产物进行纯化,去除未反应的染料和其他杂质。常用的纯化方法有透析、凝胶过滤色谱、超滤等。例如,使用透析袋将标记产物在缓冲液中透析数小时至过夜,以去除小分子杂质。
名称:CY5-NHS
CAS:1032678-42-4
纯度:95%+
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
厂家 :齐岳生物
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用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
以上产品来源于齐岳生物axcAXC.2025.02.25