Cy5荧光染料标记铁皮石斛多糖的方法,CY5-铁皮石斛多糖
铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharide, DOP)是一种由甘露糖、葡萄糖、半乳糖等单糖通过糖苷键连接而成的水溶性多糖,具有羟基(-OH)和羧基(-COOH)等官能团。Cy5(Cyanine 5)是一种近红外菁染料,其结构包含两个吲哚啉环通过甲川链连接,两端带有磺酸基团以增强水溶性。Cy5 的最大吸收波长为 649 nm,发射波长为 670 nm,呈现红色荧光。
标记方法
多糖活化:
铁皮石斛多糖分子中的羟基或羧基需先活化以引入反应位点。常用方法包括:
碳二亚胺法:加入 1 - 乙基 - 3-(3 - 二甲基氨基丙基) 碳二亚胺(EDC)和 N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS),将羧基转化为活性酯,便于与 Cy5 的氨基反应。
氨基化修饰:通过引入乙二胺等试剂,在多糖链上接枝氨基(-NH₂),为后续偶联提供靶点。
Cy5 偶联:
Cy5 通常以活化酯(如 Cy5 NHS 酯)形式参与反应。在弱碱性条件(pH 7.5-8.5)下,活化酯与多糖的氨基或羟基反应,形成稳定的酰胺键或醚键。反应体系需避光并控制温度(通常为室温至 37℃),反应时间约 2-4 小时。
纯化与表征:
通过透析或凝胶过滤色谱去除未反应的 Cy5 和副产物,使用紫外 - 可见光谱(UV-Vis)和荧光光谱检测标记效率。成功标记的 CY5 - 铁皮石斛多糖应在 649 nm 处有特征吸收峰,荧光强度显著增强。
产品名称:CY5-铁皮石斛多糖
纯度:95%+
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
仅供科研,不能用于人体实验AXC.2025.02.08