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产品名称：CY5.5-Insulin，荧光染料标记蛋白

制备与优化

（1）CY5.5-Insulin制备流程

材料准备：

重组人胰岛素溶解于PBS（pH 8.5，含10%甘油稳定构象）。

CY5.5-NHS溶解于无水DMF（浓度≤1 mM，避光）。

标记反应：

将胰岛素与CY5.5-NHS按摩尔比1:1-1:5混合，室温震荡反应2 h。

纯化与表征：

凝胶过滤：使用Sephadex G-25柱分离游离染料。

标记效率：通过荧光分光光度法（λex=675 nm，λem=695 nm）计算染料/胰岛素摩尔比。

活性验证：细胞葡萄糖摄取实验（如3T3-L1脂肪细胞）或大鼠降血糖实验。

（2）关键优化参数

pH控制：NHS偶联推荐pH 8.5-9.0（避免胰岛素聚集）。

温度与时间：低温（4℃）延长反应时间至4 h，减少副反应。

添加剂：加入甘油（5-10%）或Tween-80（0.01%）防止蛋白沉淀。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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