化学结构与性质
Cy5-WGA是一种将荧光染料Cy5与麦胚凝集素(WGA)结合的荧光标记蛋白。Cy5是一种常用的近红外荧光染料,其吸收波长约为649 nm,发射波长约为667 nm,广泛用于荧光显微镜成像和流式细胞术。麦胚凝集素(WGA)是一种从小麦胚芽中提取的糖结合蛋白,能够特异性识别和结合N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和唾液酸等糖基团,常用于细胞表面糖链的标记和检测。结合了Cy5的WGA不仅保留了其糖结合特性,还增加了荧光标记功能,使其在生物成像中具有独特的优势。
合成方法
Cy5-WGA的合成通常通过将Cy5与WGA进行化学偶联实现。Cy5具有活性的N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS酯),能够与蛋白质中的氨基(-NH2)发生反应,形成稳定的共价键。具体步骤如下:
溶解Cy5-NHS酯:将Cy5-NHS酯溶解在适当的有机溶剂(如二甲基亚砜,DMSO)中。
混合反应:将溶解后的Cy5-NHS酯与WGA混合,在温和的条件下(如室温、pH 7.4的缓冲溶液)进行反应。
纯化:反应完成后,通过透析或凝胶过滤等方法去除未反应的Cy5-NHS酯,得到纯化的Cy5-WGA。
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