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亲和纯化蛋白标签6xHis(polyhistidine)
发布时间:2025-04-08     作者:wyh   分享到:

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产品名称:亲和纯化蛋白标签6xHis(polyhistidine)

一、6×His标签的基本特性

定义:由6个连续组氨酸(His)残基组成的短肽序列(HHHHHH)。

作用:通过与金属离子(如Ni²⁺、Co²⁺)的强亲和力,实现目标蛋白的特异性纯化。

二、6×His标签的优势

小分子量:仅0.84 kDa,对目标蛋白结构影响小。

高亲和力:与Ni-NTA(镍-氮三乙酸)树脂结合力强,纯化效率高。

温和洗脱条件:可通过咪唑浓度梯度洗脱,保持蛋白活性。

兼容性强:适用于原核(如大肠杆菌)和真核(如哺乳动物细胞)表达系统。

检测便利:可通过抗His抗体或荧光标记His标签探针直接检测。

三、6×His标签的纯化流程

细胞裂解

使用超声破碎、高压匀浆或化学裂解液释放目标蛋白。

添加蛋白酶抑制剂(如PMSF)防止降解。

澄清裂解液

通过离心(12,000×g,30分钟)或过滤去除细胞碎片。

Ni-NTA亲和层析

平衡:用缓冲液(如50 mM NaH₂PO₄,300 mM NaCl,pH 8.0)平衡Ni-NTA树脂。

结合:将裂解液上样至树脂,室温或4℃孵育30-60分钟。

洗涤:用低浓度咪唑缓冲液(如20 mM)去除非特异性结合蛋白。

洗脱:用高浓度咪唑缓冲液(如250-500 mM)梯度洗脱目标蛋白。

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

亲和纯化蛋白标签6xHis(polyhistidine)

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