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产品名称:亲和纯化蛋白标签6xHis(polyhistidine)
一、6×His标签的基本特性
定义:由6个连续组氨酸(His)残基组成的短肽序列(HHHHHH)。
作用:通过与金属离子(如Ni²⁺、Co²⁺)的强亲和力,实现目标蛋白的特异性纯化。
二、6×His标签的优势
小分子量:仅0.84 kDa,对目标蛋白结构影响小。
高亲和力:与Ni-NTA(镍-氮三乙酸)树脂结合力强,纯化效率高。
温和洗脱条件:可通过咪唑浓度梯度洗脱,保持蛋白活性。
兼容性强:适用于原核(如大肠杆菌)和真核(如哺乳动物细胞)表达系统。
检测便利:可通过抗His抗体或荧光标记His标签探针直接检测。
三、6×His标签的纯化流程
细胞裂解
使用超声破碎、高压匀浆或化学裂解液释放目标蛋白。
添加蛋白酶抑制剂(如PMSF)防止降解。
澄清裂解液
通过离心(12,000×g,30分钟)或过滤去除细胞碎片。
Ni-NTA亲和层析
平衡:用缓冲液(如50 mM NaH₂PO₄,300 mM NaCl,pH 8.0)平衡Ni-NTA树脂。
结合:将裂解液上样至树脂,室温或4℃孵育30-60分钟。
洗涤:用低浓度咪唑缓冲液(如20 mM)去除非特异性结合蛋白。
洗脱:用高浓度咪唑缓冲液(如250-500 mM)梯度洗脱目标蛋白。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh
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