新型蛋白质支架DNA四分体引发交联杂交链反应(cHCR)的递送和miRNA成像

一种新型蛋白质支架DNA四分体，该DNA四分体由链霉抗生物素蛋白(SA)和四个生物素化的发夹DNA探针构建。纳米结构在其表面上修饰有致密的DNA探针，可能会因为高位阻核酸的扩增，而DNA四分体上仅修饰四个DNA探针，结构相对松散，有利于引发交联杂交链反应(cHCR)从而进行核酸递送和miRNA成像。

图文解析

方案1(A) DNA四分体引发cHCR及(B)细胞内miRNA超灵敏成像示意图。分别在SA上合成Cy3标记的H1和Cy5标记的H2的DNA四分体，在目标miRNA存在情况下，H1被打开与H2发生HCR形成3D交联的水凝胶网络，在cHCR产物中，Cy3荧光供体和Cy5受体距离被拉近发生FRET；在靶标miRNA不存在的情况下，H1和H2之间不发生cHCR，同时也无法观察到FRET信号。

图1(A)四种SA-DNA复合物的琼脂糖凝胶（3％）电泳图像；(B)H2和DNA四分体的荧光各向异性；(C)游离SA和DNA四分体的Zeta电位。SA是具有四个生物素结合位点的四聚体蛋白质，可以获得四种类型的SA-DNA复合物(SA与DNA比例分别为1：1、1:2、1:3、1:4)，从图中可以得出，不同浓度比的DNA与SA得到分子量不同的四个条带(图A)，说明形成了四种不同的复合物，荧光各向异性分析和zeta电位分析同时也验证了DNA探针与SA之间的相互作用(图B、C)。

图2 (A)L-02细胞与SA-Cy3孵育；(B)与修饰有H4和SA-Cy3的DNA四分体孵育；(C)与修饰有H2-Cy5和SA的DNA四分体孵育；(D-F)与修饰H2-Cy5和SA-Cy3 DNA四分体孵育，Cy3通道、Cy5通道以及merge荧光图像。从图中可以得出，DNA四分体能够在没有转染试剂的帮助下进入细胞，并且DNA四分体能在细胞中保持结构完整。

图3(A)载有H2的DNA四分体与HeLa细胞孵育不同时间的流式细胞术分析；(B)不同浓度载有H2的DNA四分体与HeLa细胞孵育的流式细胞术分析；(C)不同孵育时间的载有H2的DNA四分体的亚细胞定位成像。如图所示，在15min内能观察到基本的荧光峰值，45min左右达到饱和，说明DNA四分体的递送(图3A)；荧光强度随DNA四分体浓度的增加而增加(图3B)；从亚细胞定位成像结果可以看出，孵育时间从15min增加到60min，Cy5荧光逐渐增加并从溶酶体扩散到细胞质中(图3C)；这些结果表明DNA四分体是核酸递送平台，同时具有较高的溶酶体效率。

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ANB-NOS交联剂 60117-35-3 N-5-叠氮基-2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亚胺

BMPS交联剂 55750-62-4 N-（ß-马来酰亚胺丙氧基）琥珀酰亚胺酯

EMCS交联剂 55750-63-5 N- [e-马来酰亚胺基己酰氧基]琥珀酰亚胺酯

GMBS交联剂 80307-12-6 N- [γ-马来酰亚胺丁酰氧基]琥珀酰亚胺

LC-SPDP交联剂 158913-22-5 琥珀酰亚胺基6-（3- [2-吡啶基二硫代]-丙酰胺基）己酸酯

MBS交联剂 58626-38-3 间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯

PDPH交联剂 1171706-57-2 3-[2-吡啶基二硫代]丙酰肼

SBA交联剂 42014-51-7 N-琥珀酰亚胺基溴乙酸酯

SIA交联剂 39028-27-8 N-琥珀酰亚胺碘乙酸酯； NHS-碘乙酸酯

Sulfo-SIA交联剂 108906-15-6 N-磺基琥珀酰亚胺碘代乙酸盐

SMCC交联剂 64987-85-5 琥珀酰亚胺基-4- [N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧酸酯

SMPB交联剂 79886-55-8 N-琥珀酰亚胺基4[4马来酰亚胺基苯基]丁酸酯

SMPH交联剂 367927-39-7 琥珀酰亚胺-6- [ß-马来酰亚胺基丙酰胺基]己酸酯

SPDP交联剂 68181-17-9 N-琥珀酰亚胺基3- [2-吡啶基二硫代]-丙酸酯

Sulfo-LC-SPDP交联剂 169751-10-4 磺基琥珀酰亚胺基63[2吡啶基二硫代]丙酰胺基）己酸酯

Sulfo-MBS交联剂 92921-25-0 间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯

Sulfo-SANPAH交联剂 102568-43-4 N磺基琥珀酰亚胺6[4叠氮基-硝基苯基氨基]己酸酯

Sulfo-SMCC交联剂 92921-24-9 磺基琥珀酰亚胺基-4- [N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-甲酸

BS2G交联剂 / 双[磺基琥珀酰亚胺基]戊二酸酯

BS3交联剂 82436-77-9 辛二酸双[磺基琥珀酰亚胺

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DSP交联剂 57757-57-0 二硫代双[琥珀酰亚胺丙酸酯

DSS交联剂 68528-80-3 辛二酸二琥珀酰亚胺酯

DSSeb交联剂 23024-29-5 癸二酸二琥珀酰亚胺酯

DST交联剂 62069-75-4 酒石酸二琥珀酰亚胺酯

DTSSP交联剂 81069-02-5 3,3′-二硫代双[磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯]

EGS交联剂 70539-42-3 乙二醇双（琥珀酰亚胺基琥珀酸酯）

Sulfo-EGS交联剂 167410-92-6 乙二醇双（磺基琥珀酰亚胺基琥珀酸酯）

小编：wyf 05.06