DSPE-PEG-NH2 MW:2000制备脂质体的步骤详解！

以下是DSPE-PEG-NH₂（MW:2000）用于制备脂质体的详细步骤，适用于靶向修饰型长循环脂质体（如药物递送、纳米载体设计）：

一、材料准备

1. 必备原料

磷脂主成分：如 HSPC（卵磷脂）、DSPC 或 Egg-PC；

胆固醇：调节膜流动性；

DSPE-PEG2000-NH₂：提供亲水性和表面功能化修饰能力；

有机溶剂：氯仿/甲醇（体积比 2:1）；

水相溶剂：PBS 或去离子水；

药物或负载物（可选）；

超声仪、旋转蒸发器、挤出装置等仪器设备。

二、脂质体制备步骤详解（薄膜水化-挤出法）

步骤 1：脂质溶液配制

按摩尔比配制脂质混合物，如：

HSPC：胆固醇：DSPE-PEG2000-NH₂ = 65:30:5（mol/mol/mol）；

将脂质溶解在氯仿/甲醇混合溶剂中；

可加入脂溶性药物一同溶解（如紫杉醇等）；

室温超声10分钟使混合均匀。

步骤 2：旋转蒸发形成脂质膜

将混合脂质溶液转移至圆底烧瓶；

用旋转蒸发仪（温度 40–50 °C，真空）缓慢蒸干溶剂；

形成均匀的干脂质膜于烧瓶内壁上；

可置于真空干燥箱中继续抽干2–4小时，去除残余有机溶剂。

步骤 3：水化脂质膜

用适量 PBS（pH 7.4）或缓冲液加入脂质膜中；

37 °C水浴下缓慢旋转或震荡 30 分钟水化，使脂质膜剥落形成多层脂质体（MLVs）；

可加入亲水性药物于水化缓冲液中（如阿霉素）。

步骤 4：均质处理

使用超声处理或挤出（通过聚碳酸酯膜）以控制粒径：

推荐用挤出器依次通过 400 nm、200 nm、100 nm 滤膜 10 次；

得到粒径均一的单层小脂质体（SUVs）；

可检测 Zeta 电位、粒径分布（如 DLS）。

步骤 5：功能化与纯化

若 DSPE-PEG-NH₂ 作为表面功能基团用于进一步修饰（如与靶向分子、荧光标记物结合）：

可通过后修饰法使用 NHS 活性酯、EDC/NHS 化学连接；

若脂质体中含游离药物或未反应物，可采用透析法、超滤或凝胶柱（如 Sephadex G-50）进行纯化。

三、关键技术参数建议

四、备注与提示

DSPE-PEG2000-NH₂具有亲水PEG链和脂溶尾部，可嵌入脂质体双层并将氨基暴露于表面；

氨基基团可与活性酯反应偶联靶向分子如叶酸、抗体、适配体、荧光探针；

若不需要偶联修饰，可直接用于提高循环稳定性、减少蛋白吸附（stealth effect）；

建议制备后立即使用，或在 4 °C 避光储存。