氯磷酸盐脂质体清除骨巨噬细胞的文献汇总

巨噬细胞是一种多用途的细胞群，在清除局部组织中的细菌、将警报信号翻译给其他免疫细胞、分泌细胞因子建立局部稳态免疫细胞网络、参与T细胞在薄板内的再刺激和维持方面起着至关重要的作用。

氯膦酸盐脂质体（Clodronate Liposomes）是目前*为成熟，*为经济且*为理想的一种有效的巨噬细胞清除工具。脂质体包裹氯膦酸盐通常用于清除巨噬细胞群，因为它一旦被巨噬细胞吞噬，被溶酶体酶消化，游离氯膦酸盐在细胞质内积累，当浓度超过一定阈值时就会产生功能上不可逆的抑制和细胞凋亡。由于氯膦酸盐在血液中的半衰期只有几分钟，游离的氯膦酸盐会被肾脏迅速清除。借助腹腔，尾静脉等多种给药方式实现不同组织部位中巨噬细胞的清除。Clophosome®（氯氟松）是目前市场上*理想的用于体内/体外巨噬细胞清除的氯磷酸二钠脂质体。

在大脑中，常驻小胶质细胞与血管周围和脑膜巨噬细胞一起由胚胎卵黄囊前体产生，占所有脑细胞的10%。在这些研究中，氯膦酸盐脂质体通过脑内或脑室注射给药。小胶质细胞耗竭的不同效果可能是由于疾病模型、动物种类、动物年龄或氯膦酸钠给药剂量和时间的不同造成的。

以下是小编带来的几篇文献整理，供大家参考。

文献一

动物模型：C57BL/6J小鼠，使用海马切片培养直接研究小胶质细胞

巨噬细胞清除脂质体：Combo Kit: Clophosome^®, Clophosome^®- A And Control Liposomes (Cat#F70101C-AC)

巨噬细胞清除方法：在体外试验天数的第0天和第3天，在培养基中加入0.05 mg/mL Clophosome-A 培养24小时。对照组给予等量阴离子脂质体对照加入到培养基中。处理后，切片用加热的PBS仔细冲洗三次，并用新鲜培养基培养。

巨噬细胞清除结果：

在氯膦酸处理的培养物中，小胶质细胞被显著去除(图A, 3)，而氯膦酸钠对神经元密度无影响

参考文献：Araki T, Ikegaya Y, Koyama R. Microglia attenuate the kainic acid-induced death of hippocampal neurons in slice cultures. Neuropsychopharmacol Rep. 2020;40(1):85-91. doi:10.1002/npr2.12086

文献二

动物模型：C57BL/6J小鼠 

巨噬细胞清除脂质体：Clophosome® - Clodronate Liposomes (Neutral)（F70101C-N-2）

巨噬细胞清除方法：每只小鼠给药70 µg，相当于10μL体积，如下图所示，注射到左心室

巨噬细胞清除结果：

脑室内的氯膦酸钠导致血管周围CD206阳性巨噬细胞的清除，但不影响小胶质细胞(P2Y12R标记，绿色)。用内皮标记物番茄凝集素(蓝色)观察血管。

氯膦酸脂质体或PBS注射后血管周围巨噬细胞数量的定量分析。

参考文献：Császár E, Lénárt N, Cserép C, et al. Microglia modulate blood flow, neurovascular coupling, and hypoperfusion via purinergic actions. J Exp Med. 2022;219(3):e20211071. doi:10.1084/jem.20211071

文献三

动物模型：C57BL/6雄性小鼠(8 ~ 10周龄，23 ~ 25 g)；C57BL/6背景Cx3cr1GFP/+小鼠(雄性，8 ~ 10周龄，23-25 g)

巨噬细胞清除脂质体：

Clophosome^®-A - Clodronate Liposomes (Anionic)（Cat#F70101C-A)

DiI Fluorescent Control Liposomes for Clophosome^® -A (Anionic) (2mL) (Cat#F70101F-A-2)

巨噬细胞清除方法：

Cx3cr1GFP/+小鼠和C57BL/6小鼠按先前报道的方法，将1 μL的Liposomes 或1 μL的对照Dil-Lip注射到左纹状体(距囟门前方0.8毫米，外侧2.0毫米，深度为3.0毫米)

巨噬细胞清除结果：

A.

注射Clodronate liposomes于24小时开始在脑实质中消耗小胶质细胞，注射1 μL Dil-Lip后第1天的一系列脑切片（脂质体用红色荧光染料Dil标记）进入纹状体（图A第一排）或脑侧室（图A第二排）

代表性图像显示，纹状体注射 Dil-Lip或Clodronate liposomes后不同时间点Cx3cr1-GFP+小胶质细胞（绿色）的耗竭。（图A第三、四排）显示放大后的小胶质细胞图像。

B.

注射1 μL Clodronate liposomes后纹状体Cx3cr1-GFP+细胞的量化数据（图B）。

C.

在Clodronate liposomes注射后的第1、4、7天，用流式细胞术分析Cx3cr1-GFP+小胶质细胞。图中显示了代表性的点图，并显示了纹状体细胞群中Cx3cr1-GFP+的百分比。红色：Cx3cr1-GFP−细胞群；绿色：Cx3cr1-GFP+细胞群（图C）。

D.

图表显示注射Clodronate liposomes后纹状体和皮层中剩余Cx3cr1-GFP+种群的百分比（图D）。

参考文献：Han X, Li Q, Lan X, El-Mufti L, Ren H, Wang J. Microglial Depletion with Clodronate Liposomes Increases Proinflammatory Cytokine Levels, Induces Astrocyte Activation, and Damages Blood Vessel Integrity. Mol Neurobiol. 2019;56(9):6184-6196. doi:10.1007/s12035-019-1502-9

文献四

动物模型：大鼠幼崽 (P9- P10)

巨噬细胞清除脂质体：

Combo Kit: Clophosome^®, Clophosome^®- A And Control Liposomes (Cat#F70101C-AC)

巨噬细胞清除方法：海马切片培养中加入氯膦酸脂质体体外18天，浓度0.5 mg/mL（氯膦酸共500 µg），24小时后，用培养基轻轻洗涤培养物，并给予另一剂量的0.5 mg/mL氯膦酸脂质体，再孵育24小时，此时再次洗涤培养物，置于新培养基中，孵育7天。第7天，培养的小胶质细胞耗尽，准备进行后续实验。

巨噬细胞清除结果：

小胶质细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞和神经元的代表性细胞特异性标记染色（Iba1，
GFAP, CNPase和NeuN）分别显示与对照组（第一排）相比氯膦酸脂质体处理（第二排）的切片小胶质细胞耗竭，且对其他细胞类型没有影响（比例尺，20毫米）。

参考文献：

Pusic KM, Pusic AD, Kemme J, Kraig RP. Spreading depression requires microglia and is decreased by their M2a polarization from environmental enrichment. Glia. 2014;62(7):1176-1194. doi:10.1002/glia.22672