DSPE-PEG2000-TCO 与 Tetrazine 修饰分子的偶联实验方案或构建脂质体修饰方法
下面是 DSPE-PEG2000-TCO 与含 Tetrazine（四嗪）官能团分子的偶联实验方案，适用于构建靶向脂质体、纳米粒、表面修饰平台等应用。
实验名称
DSPE-PEG2000-TCO 与 Tetrazine-功能分子的生物正交偶联反应实验
一、实验目的
通过反式环辛烯（TCO）-四嗪（Tetrazine）生物正交反应，将 DSPE-PEG2000-TCO 与含 Tetrazine 的小分子、蛋白质或荧光探针等进行快速、高效、特异性的共价偶联，构建靶向功能脂质材料或纳米平台。
二、材料与试剂
名称 | 规格 | 说明 |
DSPE-PEG2000-TCO | ≥95%，粉末或2 mg/mL 溶液 | 脂质-聚合物修饰剂 |
Tetrazine 修饰分子（如 Tetrazine-荧光探针、Tetrazine-适配体） | 可溶于水或DMSO | 应具备亲水性与目标识别能力 |
PBS缓冲液（pH 7.4） | 1×，无菌过滤 | 保持生理反应环境 |
DMSO（如有需要） | 分析纯 | 溶解 Tetrazine 分子 |
超滤离心管（MWCO 10 kDa） | 0.5 mL/2 mL | 纯化反应产物 |
三、实验步骤
① 反应准备
将 DSPE-PEG2000-TCO 溶解于 PBS 或水中，浓度设定为：0.5–1 mg/mL
将 Tetrazine-修饰分子溶解于 PBS 或少量 DMSO 中（确保 DMSO 含量不超过总体系的 5%）
按摩尔比 1:1.2（TCO : Tetrazine）混合两者
② 反应条件
温度：25°C（室温）
反应时间：15–60 分钟（通常30分钟足够）
避光操作：TCO 和部分 Tetrazine 探针对光敏感
③ 产物纯化
采用 超滤离心（10 kDa 截留） 去除未反应的游离 Tetrazine 探针；
可根据用途进一步纯化（如透析、SEC）或用于后续脂质体构建。
四、结果表征（可选）
方法 | 用途 |
紫外-可见吸收光谱（UV-Vis） | 判断探针是否成功偶联 |
动态光散射（DLS） | 若用于脂质体，检测粒径变化 |
傅里叶红外光谱（FTIR） | 验证共价键形成（可选） |
荧光光谱或成像 | 若偶联荧光探针，可用于功能验证 |
五、应用延伸
1. 构建脂质体表面功能化：
将 DSPE-PEG2000-TCO 融入脂质体（与DSPC、胆固醇混合，薄膜水化法）
然后加入 Tetrazine-功能分子，直接在脂质体表面反应
快速偶联，无需催化，无需高温
2. 构建细胞膜标记探针：
将 DSPE-PEG2000-TCO 加入细胞培养液，嵌入细胞膜
然后加入 Tetrazine-荧光探针，即可标记细胞表面
注意事项
项目 | 建议 |
避光操作 | TCO 和 Tetrazine 对光敏感，建议避光反应 |
不可高温 | 避免 >40°C，TCO 会降解 |
避免氧化 | 可充氮保存，TCO 对氧也较敏感 |
立即使用产物 | 产物建议当天使用或低温保存（-20°C） |
相关反应背景
此类 TCO-Tetrazine 属于 SPAAC（Strain-Promoted Inverse-Electron-Demand Diels–Alder Cycloaddition）；
无需催化剂，对活细胞、组织友好；
常用于纳米材料修饰、蛋白偶联、原位标记、药物递送。
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