DSPE-PEG-DBCO 与某叠氮分子结合的合成实验步骤
以下是 DSPE-PEG-DBCO 与叠氮分子结合的标准点击化学合成实验步骤，适用于水相体系中的偶联反应，如构建靶向脂质体、纳米药物载体、或表面修饰材料。
一、反应概述（无铜点击 SPAAC 反应）
反应类型： 应变促进叠氮-炔烃环加成（SPAAC）
核心反应：
DSPE-PEG-DBCO + R–N₃ → DSPE-PEG-Triazole-R
二、所需材料
1. 原料化合物
化合物 | 说明 |
DSPE-PEG2000-DBCO | 商品名：DSPE-PEG-DBCO，MW ≈ 2800 Da |
叠氮修饰分子 R–N₃ | 如 N₃-染料、N₃-适配体、N₃-糖、小分子等 |
2. 溶剂与缓冲液（视应用选择）
去离子水、PBS（pH 7.4）、HEPES（pH 7.2–7.5）
DMSO（如叠氮分子难溶时，可少量溶于 DMSO）
三、实验步骤
步骤 1：准备反应体系
溶解 DSPE-PEG-DBCO
将其溶于 PBS 或 HEPES 缓冲液中，浓度通常为 1–5 mg/mL
若难溶可先溶于少量 DMSO，再稀释至所需体积
溶解 R–N₃（叠氮化物）
若为小分子（如 N₃-糖/N₃-染料），直接溶于水或少量 DMSO
若为蛋白或寡核苷酸，应在合适缓冲液中溶解
步骤 2：反应混合与孵育
按摩尔比 1:1.2（DSPE-PEG-DBCO:R–N₃） 混合
室温或 37°C 反应 2–4 小时
避光操作（如涉及荧光探针）
示例：
DSPE-PEG-DBCO (100 μL, 2 mg/mL)
+ N₃-Cy5 (10 μL, 1 mM)
→ 混合总量至 200 μL，PBS缓冲液中反应 2 小时
步骤 3：产物纯化
根据 R–N₃ 分子大小选择合适方式：
情况 | 纯化方法 |
小分子（Cy5,糖类） | 超滤（Amicon 10–30 kDa） |
DNA/RNA, aptamer | 透析袋（MWCO 3.5–8 kDa） |
脂质体修饰 | 超速离心、SEC 层析 |
聚合物纳米粒子表面修饰后 | 离心洗涤、透析 |
步骤 4：分析与验证
UV-Vis/NIR：监测 DBCO 峰消失、新荧光峰生成
FTIR/质谱：确认三唑环形成
DLS、Zeta、电镜：用于脂质体/纳米粒稳定性验证
流式细胞术、共聚焦显微镜：用于靶向功能验证（如含荧光染料）
四、注意事项
项目 | 建议 |
pH 控制 | 建议保持在 7.0–7.4，避免极端酸碱 |
DMSO 含量 | ≤10%，以免影响生物体系稳定性 |
无需铜催化剂 | 与 CuAAC 不同，SPAAC 不需催化剂 |
防止水解 | DSPE-PEG-DBCO 避免长时间暴露于水中 |
储存条件 | DSPE-PEG-DBCO 建议 –20°C 干燥避光储存 |
五、典型实验数据参考（示例）
项目 | 值 |
DSPE-PEG-DBCO 用量 | 2 mg（约 0.7 μmol） |
N₃-Cy5 用量 | 1.2 eq（约 0.84 μmol） |
反应时间 | 2 小时，室温 |
成品纯度 | 95%以上（超滤除去游离染料） |
应用示例 | 构建靶向脂质体，细胞成像等 |
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