DSPE-PEG2000-HA纳米载体制备方法

DSPE-PEG2000-HA（二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-透明质酸）纳米载体的制备需结合脂质体/胶束自组装与靶向配体偶联技术，核心流程如下：

一、‌材料准备‌

关键原料‌：

主脂质‌：DSPE-PEG2000-NH₂或DSPE-PEG2000-COOH（作为反应基团载体）。

靶向配体‌：透明质酸（HA，分子量5-20 kDa，含氨基或羧基官能团）。

辅助脂质‌：HSPC（氢化大豆磷脂）、胆固醇（调节膜流动性）。

溶剂‌：氯仿/甲醇（体积比2:1）、PBS缓冲液。

设备‌：

旋转蒸发仪、超声仪、挤出器（含100-200 nm聚碳酸酯膜）、超滤装置（截留分子量10 kDa）。

二、‌制备步骤‌

DSPE-PEG2000-HA复合物合成‌

羧基活化‌：若使用DSPE-PEG2000-COOH，需先用EDC/NHS活化羧基（摩尔比1:1.2:1.2，pH 5.5-6.0，室温反应2小时）。

HA偶联‌：将活化后的DSPE-PEG2000与HA（摩尔比1:1.5）在pH 7.4条件下反应6小时，生成DSPE-PEG2000-HA。

纯化‌：通过透析（MWCO 10 kDa）或超滤去除未反应的HA，产物纯度>90%。

脂质体/胶束制备（薄膜水化-挤出法）‌

脂质配方‌：按摩尔比配制混合脂质（如HSPC:胆固醇 = 65:30:5）。

有机相溶解‌：将脂质溶于氯仿/甲醇混合溶剂，超声10分钟至均匀。

脂质膜形成‌：旋转蒸发（40°C）去除溶剂，真空干燥2小时形成均匀薄膜。

水化与挤出‌：加入PBS缓冲液（含药物，如紫杉醇），45°C水化30分钟，超声处理后经200 nm膜挤出3-5次，得到粒径约120 nm的纳米颗粒。

载药与纯化‌

被动载药‌：脂溶性药物（如紫杉醇）直接溶于有机相，包封率可达85%-90%。

主动载药‌：水溶性药物（如顺铂）通过pH梯度法加载，包封率提升至75%以上。

纯化‌：超滤法去除未包封药物，载药量计算公式： \text{载药量} = \frac{\text{包封药物量}}{\text{脂质体总质量}} \times 100\% $$ :ml-citation{ref="4,6" data="citationList"}。

三、‌关键参数优化‌

四、‌表征与验证‌

粒径与Zeta电位‌：动态光散射（DLS）测定粒径（PDI<0.2），Zeta电位反映表面电荷（HA修饰后常为-15至-25 mV）。

HA偶联效率‌：茚三酮法测定游离氨基减少量，或FTIR验证HA特征峰（如羧基伸缩振动峰1720 cm⁻¹）。

体外靶向性‌：流式细胞术检测CD44+肿瘤细胞对载体的摄取率（较非靶向载体提升3-5倍）。

五、‌注意事项‌

稳定性控制‌：冻干时需添加5%蔗糖或海藻糖作为保护剂，复溶后粒径变化<10%。

免疫原性‌：HA需选用低分子量（<20 kDa）并控制修饰密度，避免激活TLR通路。

批次一致性‌：合成中严格监控EDC/NHS反应时间与pH，避免过度交联。

通过上述流程，DSPE-PEG2000-HA纳米载体可实现高靶向性、长循环及可控药物释放，适用于肿瘤治疗与诊疗一体化场景。

关于我们：

西安齐岳生物提供多种聚乙二醇（PEG）相关产品，其中PEG衍生物系列丰富，涵盖不同分子量与活性基团修饰类型。例如，公司可提供含羧基（-COOH）、氨基（-NH₂）、马来酰亚胺（Mal）等功能化PEG，适配药物递送载体修饰需求；针对生物偶联场景，提供荧光标记PEG（如FITC/Cy染料修饰）及靶向分子（如叶酸-PEG）以增强载体靶向性；同时供应PEG-磷脂复合物（如DSPE-PEG）用于脂质体制备，以及可生物降解的PEG嵌段共聚物（如PLGA-PEG、PCL-PEG）以实现药物缓释。所有产品均经过严格纯化（纯度≥95%），支持定制化分子量与官能团组合，并提供配套表征服务，满足科研及工业级应用需求。 

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