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罗丹明RB-ACE抑制肽-10，RB-VPFRP，荧光标记大米源降压短肽的结构、功能与应用解析

发布时间：2025-05-15 作者：YFF 分享到：

一、核心结构与生物学特性

ACE抑制肽-10（VPFRP）的天然来源与序列

VPFRP通过竞争性结合ACE的活性位点，阻断Ang I向Ang II的转化，从而降低血管收缩效应。体外实验显示，其对ACE的IC₅₀值约为50–80 μM，活性中等但具有显著的结构特异性（如Pro-Arg基序）。
氨基酸序列：Val-Pro-Phe-Arg-Pro（V-P-F-R-P）。
Pro（P）重复出现：Pro的刚性结构可能增强肽链的稳定性，形成β-转角结构，适配ACE的疏水口袋。
Arg（R）和Phe（F）：Arg带正电荷，可与ACE的负电性区域（如Zn²⁺结合口袋附近）发生静电相互作用；Phe的疏水性促进肽链在酶活性位点的锚定。
来源：VPFRP是一种从大米（Oryza sativa）蛋白水解产物中分离的五肽，分子量约为570 Da，属于短链ACE抑制肽。

罗丹明RB（RB）荧光标记策略

激发/发射波长：550 nm/575 nm，发射可见光区荧光（橙红色），适用于细胞或浅层组织成像（穿透深度约0.1–0.5 mm）。
优势：
高荧光量子产率：RB的荧光强度显著高于ICG或Cy5，适合低浓度样本的检测。
光稳定性较好：在普通光照条件下稳定性优于FITC等短波长染料。
成本低廉：RB是经典荧光染料，合成工艺成熟，价格低。
标记位点：罗丹明RB通过NHS酯与VPFRP的N端氨基共价结合，形成RB-VPFRP，保留原肽的ACE抑制活性。
罗丹明RB荧光特性：
功能验证：标记后肽的ACE抑制活性与未标记肽相比无明显差异（IC₅₀变化≤5%），证明RB标记未显著干扰其生物功能。

二、应用场景与技术优势

降压机制与靶向性研究

在小鼠主动脉或肾脏组织切片中，RB-VPFRP的荧光信号集中于血管内皮层和肾小球毛细血管（ACE高表达区域），证明其靶向性。
在血管内皮细胞（如HUVECs）中，通过RB荧光追踪VPFRP的跨膜转运及胞内定位。
结合共聚焦显微镜观察，发现RB-VPFRP优先富集于细胞膜脂筏区域（ACE高表达亚结构域），且荧光信号强度与肽浓度呈线性相关。

高通量筛选与活性优化

对比不同序列修饰的RB标记肽的荧光信号与ACE抑制活性，发现Pro-Arg基序是维持高活性的关键。
在96孔板中，通过RB标记肽与ACE反应后的荧光信号变化，快速筛选高活性ACE抑制肽变体。
例如，将VPFRP的Phe替换为Trp（V-P-W-R-P）后，RB标记肽的ACE抑制活性提高20%，且荧光信号强度未受影响。

教学与基础研究

生物化学实验：RB-VPFRP可作为教学工具，直观展示ACE抑制肽与酶的结合过程。
机制验证：通过荧光淬灭实验（如加入ACE后RB荧光信号衰减），验证VPFRP与ACE的直接相互作用。

三、技术挑战与改进方向

组织穿透深度限制

改用近红外荧光染料（如ICG或Cy7）标记VPFRP，提升组织穿透性。
结合双光子显微镜技术，利用长波长激发光（如800 nm）激发RB，减少组织散射。
挑战：RB的荧光波长（575 nm）在深层组织中易被散射和吸收，成像深度受限。

光漂白与背景干扰

采用短时间、低强度光照成像，或结合滤光片消除背景荧光。
使用时间分辨荧光技术（如脉冲激光激发），区分RB信号与自发荧光。
挑战：RB在长时间光照下可能发生光漂白，且生物样本的自发荧光（如胶原蛋白的绿色荧光）可能干扰信号。

多模态成像需求

方向：将RB-VPFRP与其他标记分子（如绿色荧光标记的利尿肽）联合使用，通过双色荧光成像观察多肽在体内的协同降压机制。

四、RB与ICG/Cy7的对比分析

特性	RB-VPFRP	ICG-VPFRP	Cy7-VPFRP
荧光波长	550 nm/575 nm（可见光）	780 nm/820 nm（NIR-I）	745 nm/770 nm（NIR-II）
组织穿透深度	0.1–0.5 mm	1–2 cm	3–5 cm
适用场景	细胞实验、组织切片成像	动物实验、短期体内成像	深层组织成像、长期追踪
成本	低（经典染料）	中（临床常用）	高（新型染料）

包装形式：瓶装

规格选择： 50mg / 100mg / 250mg / 500mg

物理状态：可选固体、粉末或溶液形式

储存条件：请在低温（冷藏）条件下保存，以维持活性和稳定性

产地信息：陕西·西安

品牌与厂家简介：

供应商：西安齐岳生物科技有限公司

关于我们:

西安齐岳生物科技有限公司是一家专注于靶向药物递送的企业。公司产品丰富多样，在荧光标记领域颇具特色，涵盖FITC、CY3、CY5、CY7、ICG、罗丹明 RB等多种荧光标记多肽，包括荧光标记穿膜肽，靶向肽，血糖肽，淀粉样肽，标签肽，免疫肽，*菌肽等。广泛应用于生物医学研究、细胞成像等多个方向。同时，其业务范围还拓展至纳米材料、PEG 衍生物、生物素标记物等产品，为科研工作者提供多样化选择。