SYBR Green I 荧光染料的应用场景和颜色是什么？

SYBR Green I 是一种常用于分子生物学中的绿色荧光核酸染料，能够与双链DNA（dsDNA）特异性结合并增强其荧光强度，常用于 实时荧光定量PCR（qPCR）、琼脂糖凝胶电泳染色、DNA定量检测等。

基本信息

名称：SYBR Green I

发射颜色：绿色荧光

激发波长（Excitation）：约 497 nm

发射波长（Emission）：约 520 nm

荧光增强：与dsDNA结合后荧光增强超过1000倍

结构：为非共价结合小分子染料，具有疏水性吡啶结构，可插入双螺旋结构中

应用场景

实时荧光定量PCR（qPCR）

SYBR Green I在PCR扩增过程中不断与新合成的双链DNA结合，从而同步监测荧光强度，反映扩增产物的量。

优势：操作简单、价格低廉、可用于广泛的引物对

劣势：特异性不如TaqMan探针，因为SYBR Green无法区分特异扩增与非特异扩增（如引物二聚体）

琼脂糖凝胶染色

可作为替代溴化乙锭（EB）的低毒DNA染料，荧光强度高，安全性更好

通常在预染或泳后染色步骤使用

DNA定量检测

通过与标准曲线比对，可用于快速测定DNA浓度

注意事项

特异性问题：SYBR Green I 只要与双链DNA结合就能发光，因此可能会对非特异产物（如引物二聚体）产生信号干扰。

高浓度抑制反应：过量的SYBR Green可能会抑制PCR反应，建议使用厂家推荐浓度（通常为1×工作浓度）。

不适用于RNA直接检测，除非先进行反转录。

避光保存：对光敏感，应在避光、低温（通常为-20°C）条件下保存。

✅ 优点

使用方便，兼容性好

成本低于TaqMan探针类染料

与大多数qPCR平台兼容

可广泛用于常规PCR和电泳分析

缺点

对非特异性扩增敏感

无法用于多重PCR检测

难以区分不同片段大小的产物

荧光定量PCR或核酸电泳实验，SYBR Green I 是一个常用且高效的工具。需要提高特异性时，建议结合熔解曲线分析或考虑使用特异性探针（如TaqMan）。