X-Rhodamine MAL的反应步骤
X-Rhodamine MAL 是一种常用的荧光标记试剂,结合了罗丹明染料的强荧光性质和马来酰亚胺基团的高反应活性,应用于蛋白质、核酸和其他生物大分子的标记与检测。该试剂能够通过马来酰亚胺基团特异性地与生物大分子中的巯基(–SH)反应,实现共价偶联,从而将强荧光团稳定地连接到靶分子上。
典型的标记反应步骤包括以下几个阶段:
样品准备:目标蛋白质或核酸首先溶解于适当的缓冲液中,缓冲液pH一般控制在6.5至7.5之间,以保持马来酰亚胺基团的活性,同时保证生物分子的稳定性。样品中应尽量避免含有还原剂(如DTT、β-巯基乙醇),因为它们会与马来酰亚胺竞争反应。
加入 X-Rhodamine MAL:将X-Rhodamine MAL以适当的摩尔比加入到样品溶液中。由于马来酰亚胺对巯基的高选择性,标记过程一般需要轻轻混合并于室温下孵育30分钟至数小时,具体时间取决于标记物浓度和巯基的暴露程度。
反应终止:反应结束后,加入含巯基的缓冲液或胺类物质(如胺基乙醇)以终止反应,阻断未反应的马来酰亚胺基团,避免进一步非特异性结合。
纯化分离:通过透析、凝胶过滤层析或高效液相色谱(HPLC)去除未反应的自由染料,确保终产物的纯度和标记效率。
表征检测:采用紫外-可见光光谱(UV-Vis)确认标记效率和浓度,通过SDS-PAGE和荧光成像分析蛋白质的标记状态。质谱和等电聚焦可用于进一步验证偶联的化学性质。
名称:X-Rhodamine MAL
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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