CY5-Avidin，荧光染料CY5标记亲和素蛋白的反应步骤

CY5-Avidin的制备核心是通过共价偶联将荧光染料CY5标记到亲和素蛋白（Avidin）分子上，以下为详细的反应步骤：

材料准备

纯化亲和素蛋白（浓度一般1-10 mg/mL）

CY5活性酯（如CY5-NHS酯），常溶于DMSO或DMF

缓冲液：通常使用碳酸氢钠缓冲液（pH 8.3-8.5），以保证胺基的活性

缓冲液调节

将亲和素溶解于碳酸氢钠缓冲液中，pH维持在8.3-8.5，确保蛋白表面赖氨酸的氨基处于未质子化状态，有利于与CY5-NHS酯发生反应。

荧光染料加入

将CY5-NHS酯溶液缓慢加入亲和素溶液中，避免过量，通常按摩尔比1:3~1:10（蛋白：染料）控制，以获得适度的标记度。

反应过程

混合液在室温下反应1-2小时，期间可轻轻摇晃以促进均匀结合。此时CY5的NHS酯基团与亲和素蛋白表面赖氨酸的游离氨基形成稳定的酰胺键，实现共价连接。

反应终止

反应完成后，通过加入甘氨酸或氨基乙醇终止反应，封闭未反应的NHS酯，避免后续非特异性反应。

纯化步骤

采用透析、凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或高速离心过滤器去除未反应的游离CY5和小分子杂质，获得纯净的CY5-Avidin标记产物。

浓度测定与标记度分析

通过紫外-可见光谱法测定蛋白和CY5的吸光度，计算标记度（染料分子数/蛋白分子数），确保标记效率和功能保持。

保存条件

纯化后的CY5-Avidin溶液可添加少量防腐剂（如叠氮钠），分装后避光低温保存（4℃），避免冻融循环，保证标记物的稳定性。

产品名称：CY5-Avidin，荧光染料CY5标记亲和素蛋白

纯度：95%+

性状：基于不同的分子量，呈白色 / 类白色固体，或液体。

溶剂：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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