文献：Milk exosomes with enhanced mucus penetrability for oral delivery of siRNA†

文献链接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2020/bm/d0bm01497d

荧光共轭DSPE-PEG叠氮化物的制备。

利用DSPE-PEG-叠氮化物（以下简称DPA）在mExo表面上实现疏水插入PEG涂层。首先将DPA溶解在2 mg mL−1的DMSO中，然后在连续搅拌下滴加到1×PBS中，使DPA的最终浓度为0.02 mg mL−1（7μM），从而制备水性储备溶液。对于涉及DPA浓度定量的研究（即mExo表面负载和锚定稳定性研究的测量），DPA通过叠氮化物DBCO点击化学反应与荧光部分DBCO-Cy5偶联。在持续搅拌下，将DBCO-Cy5（1 mg mL-1的DMSO溶液）逐滴加入DPA水溶液中，最终摩尔比为1[稀空间（1/6-em）]:[稀空间。然后在室温下轻轻摇晃该溶液6小时，以促进点击反应。点击反应后，将含有DPA-Cy5和过量DBCO-Cy5的溶液直接加入外泌体样品中进行插入。

聚乙二醇化mExo的合成。DPA疏水性插入mExo膜是通过一种被动的生物相容性过程促进的，该过程涉及mExo和DPA分子的共孵育。首先，在室温下连续搅拌下，将125μL mExo原液滴加到DPA水溶液中，最终反应混合物体积为1.5 mL。然后将该混合物在37°C下轻轻摇晃1小时，形成PEG-mExo。随后，通过在100kDa MWCO离心过滤器上离心（UFC）进行超滤，将未插入的DPA分子从PEG-mExo中分离出来。当使用UFC纯化PEG-mExo时，我们使用2次连续的旋转，每次旋转10分钟，每次旋转4000g，在此期间，用PBS将浓缩的PEG-mExo样品稀释至1.5mL进行洗涤。

在量化表面负载效率时，使用DPA-Cy5代替DPA，使用相同的负载过程。为了量化DPA表面负载，我们使用DPA与mExo颗粒的不同摩尔比进行了上述过程——5000[薄空间（1/6-em）]：[薄空间。使用平板读数器在每个最终的PEG-mExo样品中测量Cy5荧光，并将其与DBCO-Cy5的标准曲线进行比较，以量化插入mExo表面的DPA浓度。

假设UCF过滤器中保留的所有Cy5信号都来自插入mExo膜的DPA。然而，为了考虑来自保留在过滤器中的DPA-Cy5胶束的可能背景信号以及与mExo表面相关的过量DBCO-Cy5，制备了不含DPA（仅DBCO-Cy 5和mExo）和不含mExo（仅DPA-Cy 5）的对照混合物，然后如上所述纯化和定量保留的Cy5信号。从具有分级DPA[薄空间（1/6-em）]:[薄空间的（1/6-em）]mExo摩尔比的样品的测量值中减去来自这两个对照样品的Cy5信号。

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